細胞間接着による細胞増殖・分化の制御:ES細胞を用いた実験的アプローチ

通过细胞间粘附控制细胞增殖和分化：使用 ES 细胞的实验方法

• 批准号: 07254206
• 负责人: 月田 早智子
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07254206/
• 关键词: 細胞接着; 細胞増殖; ES細胞; モエシン; α-カテニン; ZO-1; ノックアウト; ラディキシン

細胞接着による細胞増殖・分化の制御機構を実験的に解析していくには、どのような試みが可能であろうか?我々は、ES(embryonic stem)細胞を用いてAJの裏打ち蛋白質の遺伝子をダブルノックアウトして、得られた細胞の細胞増殖と分化能を調べてみたいと考え、昨年および一昨年、本重点研究に公募し、研究助成を受けた。このような試みはきわめて萌芽的な研究であるが、全く行き詰まっているこの分野の研究に突破口を開く可能性もおおきいと思ったからである。一昨年、癌抑制遺伝子として働き得ると考えられるモエシン、ラディキシン、αカテニン、ZO-1のタ-ゲンティングベクターの作製がすべて完了し、昨年、すべてのシングルノックアウト細胞が得られた。最終年度である本年は、ダブルノックアウト細胞を作製し、その増殖能・分化能を詳細に検討する事を目的としたアプローチを行った。マウスのES細胞を用いた相同組換えによる遺伝子ノックアウト法は、近年、飛躍的な進歩を見せた。我々は、以下のように、まず、この方法を用いて細胞レベルで各遺伝子をダブるノックアウトし、出来たnull-細胞の性質の解析も行なった後に、その結果を踏まえて、個体レベルでの解析も行った。昨年度中に、すでに、すべてのシングルノックアウト細胞が出来上がっていた。これまでに、モエシン、ラディキシン、αカテニン、220kD蛋白質(ZO-1)のcDNAを用いてgenomic libralyをスクリーニングし、それぞれの遺伝子の頭の部分を釣り上げた。そして、これらを用いて、それぞれの遺伝子を2つ(相同染色体にのっているもの)とも破壊することを目的として研究を進め、ある程度の細胞生物学的アプローチに成功した。

The cell then による cell proliferation and differentiation <s:1> control mechanism を actual experiment に analysis であろう て くに くに みが, <s:1> ような ような try みが possible であろう て ような? I 々 は, ES (embryonic stem) cells を using い て in AJ の ち の but 伝 protein sequence を ダ ブ ル ノ ッ ク ア ウ ト し て, ら れ た と differentiated cells の rights colonization to を べ て み た い と え test, yesterday お よ び YiZuo years, the key research に public offering し, furtherance を by け た. こ の よ う な try み は き わ め な research of the burgeoning て で あ る が line, whole く き wall ま っ て い る こ の eset に の research breakthrough を possibilities open く も お お き い と think っ た か ら で あ る. YiZuo years, cancer inhibition but 伝 と し て 働 き have る と exam え ら れ る モ エ シ ン, ラ デ ィ キ シ ン, alpha カ テ ニ ン, ZO 1 の タ - ゲ ン テ ィ ン グ ベ ク タ ー の cropping が す べ て finished し, yesterday, す べ て の シ ン グ ル ノ ッ ク ア ウ が ト cells have ら れ た. Final year で あ る は this year, ダ ブ ル ノ ッ ク ア ウ ト し, the cell を cropping そ の rights can yield, can divide を detailed に beg す 検 る matter を purpose と し た ア プ ロ ー チ を line っ た. を マ ウ ス の ES cells with い た in same group え に よ る posthumous son 伝 ノ ッ ク ア ウ ト は, in recent years, the leap of な into step を see せ た. I 々 は, the following の よ う に, ま ず, こ の way を with い て cells レ ベ ル で each legacy 伝 son を ダ ブ る ノ ッ ク ア ウ ト し, out た null - cell line analytical も の nature の な っ た に, after そ の results を tread ま え て, individual レ ベ ル で の parsing line も っ た. Yesterday in the annual に, す で に, す べ て の シ ン グ ル ノ ッ ク ア ウ ト cells が out on が っ て い た. こ れ ま で に, モ エ シ ン, ラ デ ィ キ シ ン, alpha カ テ ニ ン, 220 kd protein (ZO - 1) の cDNA を with い て genomic libraly を ス ク リ ー ニ ン グ し, そ れ ぞ れ の heritage 伝 の child header part の を り fishing on げ た. そ し て, こ れ ら を with い て, そ れ ぞ れ の posthumous son 伝 を 2 つ (same chromosome に の っ て い る も の) と も broken 壊 す る こ と を purpose と し を て research into め, あ の る degree in cell biology ア プ ロ ー チ に successful し た.

项目成果

Sagara, J. et al.: "Cellular actin-binding ezrin-radixin-moesin (ERM) family proteins are incorporated into the rabies virion and closely associated with viral envelope proteins in the cell" Virology. 206. 485-494 (1995)

Sagara, J. 等人：“细胞肌动蛋白结合 ezrin-radixin-moesin (ERM) 家族蛋白被整合到狂犬病病毒粒子中，并与细胞中的病毒包膜蛋白密切相关”病毒学。

Takeda, H. et. al.: "V-src kinase shifts the cadherin-based cell adhesion from the strong to the weak state and beta-catenin is not required for the shift." Journal of Cell Biology. 131. 1839-1847 (1995)

武田，H.等。

Hirao, M. et. al.: "Phosphoinositide-dependent association of ERM proteins with the cytoplasmic domain of CD44 in vitro" Journal of Cell Biology. (in press). (1996)

平尾，M.等。

Takaishi, K. et. al.: "Translocation of activated Rho from the cytoplasm to membrane ruffling area, cell-cell adhesion sites, and cleavage furrows" Oncogene. 11. 39-48 (1995)

高石，K.等。

Tsukita, Sa et. al.: "The small GDP-binding protein rho regulates the formation of the CD44-ERM complex associated with rho-GDI" Journal of Cell Biology. (in press). (1996)

Tsukita，Sa 等。