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RhoのターゲットとしてのCD44ERM-アクチンシステム

CD44ERM-肌动蛋白系统作为 Rho 的靶标

基本信息

批准号：
07256208
负责人：
月田早智子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07256208/
关键词：
rho 細胞接着アクチン CD44 ERM rhoGDI GTP-γS ラディキシン

项目摘要

低分子量GTP結合蛋白質のうち、rhoは、細胞接着やストレスファイバー/分裂溝の形成に関わっていることから、アクチンフィラメントと細胞膜の結合部位がそのターゲットではないかと推測されている。しかし、アクチンフィラメントと細胞膜の結合部位の基本的な分子構築に関する我々の理解が浅かったために、rhoのアクチン系への作用メカニズムに関しては解析がなかなか進まなかった。我々は、アクチンフィラメントと細胞膜の結合のための基本ユニットとして、上述のCD44-ERM-アクチンシステムを同定し、そこにrhoGDIが存在する事を見いだした。したがって、このシステムがrhoの直接のターゲットとなっている可能性が高い。本研究は、CD44とERMの結合およびERMとアクチンの結合にrhoがどのような影響を及ぼすかについてin vivoとin vitroの両面からアプローチした。作業仮説としては、CD44とERMの結合、または、ERMとアクチンフィラメントの結合が、rhoによって制御されていると考えた。このことを証明するためには、まず、in vitroでこれらの結合を測定できるシステムを構築する事が必要である。そのために:(1)エズリン、ラディキシン、モエシンをそれぞれバキュロウイルスの系を用いて、大量発現させ、精製した。(2)CD44の細胞質領域とGSTの融合蛋白質を大腸菌で作らせた。(3)グルタチオンカラムを用いて、GST-CD44とリコンビナントERMとの結合を測定する系を構築した。(4)アクチンフィラメントとリコンビナントERMとの結合を、やはり、in vitroで検出する系を確立した。このようにして確立したCD44とERM、およびERMとアクチンフィラメントの結合のアッセイ系を用いて、これらの結合に対するrhoの影響を調べた。(1)rhoとしては、大阪大学高井義美教授から頂いたリコンビナントを用いた。(2)rhoをGTP-γS、およびGDP存在下で、上記のアッセイ系に加え、GTPの状態によってrhoの影響に変化があるかを調べた。

Low molecular weight GTP binding proteins are involved in the formation of cell membrane binding sites, such as rho, rho, and mitotic grooves. The basic molecular architecture of cell membrane binding sites is related to our understanding of the role of rho in the molecular architecture. The basic structure of cell membrane binding and the existence of rhoGDI can be seen in the above CD44-ERM system. The possibility of direct connection between rho and rho is high. In this study, the combination of CD44 and ERM was studied. The operation of the CD44 is described in detail below. This is the first time I've ever seen a woman. The following are the main contents of this paper:(1) The main contents of this paper are as follows: (2) The main contents of this paper are as follows: (2) CD44 in the cytoplasmic domain and GST fusion protein in Escherichia coli. (3)GST-CD-44 is the first to be used in the field. (4)The relationship between the two is confirmed. This is the first time that we've had a good time. (1) Professor Yoshimi Takai, Osaka University (2) In the presence of rho, GTP-γS and GDP, the system of rho and GTP is changed.