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間期細胞核に構造的極性はあるか?:上皮細胞の極性との関係

间期细胞核是否存在结构极性？：与上皮细胞极性的关系

基本信息

批准号：
10878127
负责人：
月田早智子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878127/
关键词：
上皮細胞核極性オクルディンカテニン ZO-1 蛍光抗体法セントロメアー

项目摘要

核の極性を見るためのプローブと条件設定:培養上皮細胞、および、上皮組織の凍結切片を用いて、間期の核の特定の位置をマークするのには、in situ hybridization法が有効と思われる。そこで、東京大学医科学研究所の稲沢博士に相談したところ、ヒトの核染色体のセントロメアに対するプローブが、シグナルも強く、この目的に最適であろうということで、多くのセントロメア特異的なプローブをいただいた。このプローブは、通常、展開した染色体に対してのマーキングに用いられているものなので、培養上皮細胞や上皮組織の凍結切片を用いて、明瞭に間期の核をマークする条件を設定し、複数のプローブを使って2重または3重染色を行った。上皮細胞の極性を同時に見るための条件設定:上記のような方法で核の一定の場所をマークして可視化することができれば、同時にその上皮細胞の形成を蛍光抗体法により観察することが必要である。上皮細胞の極性形成のマーカーとしては,私たちの研究室で作製した抗オクルディン抗体、抗ZO-1抗体、抗カテニン抗体等を用いた。in situ hybridization法の条件と蛍光抗体法の条件が異なるので、両方を満足させる条件設定を行った。観察方法:共焦点レーザー顕微鏡を用いて核の中の各マーカーの位置を上皮の極性軸に対して3次元的にプロットした。上皮細胞の極性形成および崩壊過程の観察:上記のような条件が設定されたので、すでに極性の形成された上皮細胞を観察するだけでなく、上皮細胞の極性の形成および崩壊の過程での核の極性の変化を観察した。方法としては、通常用いられているような、カルシウムスイッチによって極性を作ったり壊したりする系を用いた。

Nuclear polarity: culture of epithelial cells, freezing of epithelial tissue, in situ hybridization Dr. Ishio, Institute of Medical Sciences, University of Tokyo The conditions for the development of chromosome pairs, normal chromosome pairs, culture of epithelial cells and frozen sections of epithelial tissues, and the development of chromosome pairs, normal chromosome pairs, and multiple chromosome pairs are set. The polarity of epithelial cells can be observed simultaneously. The above method can be used to visualize certain sites of nuclei, and the formation of epithelial cells can be observed by light antibody method. The polarity formation of epithelial cells is controlled by anti-ZO-1 antibody, anti-ZO-1 antibody, etc. The conditions of the in situ hybridization method are different from those of the light antibody method. The observation method: confocal microscopy is used to detect the position of the nucleus and the polarity axis of the nucleus. Observation of the Polarization and Collapse of Epithelial Cells: Observation of the Polarization and Collapse of Epithelial Cells The method is usually used in the middle of the game, and the game is usually used in the middle of the game.