糖タンパク質糖鎖のN-アセチルガラクトサミニル化機構の解析

糖蛋白糖链N-乙酰半乳糖淀粉酰化机制分析

• 批准号: 07259221
• 负责人: 古川 清
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07259221/
• 关键词: ヒト; ウシ乳腺; ヒト乳癌; N-アセチルガラクトサミン; 糖転移酵素; 糖転移酵素遺伝子

我々はウシ乳腺上皮細胞由来の糖タンパク質Asn型糖鎖の構造を解析し、これらの糖タンパク質はN-アセチルガラクトサミン(GalNAc)を含む極めて珍しい糖鎖を持つこと、またこの糖鎖の発現は乳腺組織の機能分化と共に増大することを見い出した。今回ヒト乳汁や乳癌組織の糖タンパク質を用いて糖鎖の構造を解析した結果、ヒトでも同様な現象が見られ、かつ細胞の癌化でGalNAcを持つ糖鎖が増大する傾向が見られた。ウシ及びヒト乳腺上皮細胞の機能分化やヒト乳腺細胞の癌化の過程で消長する糖タンパク質糖鎖のN-アセチルガラクトサミニル化の調節機構を探る目的で、β-1,4-N-アセチルガラクトサミン転移酵素(GalNAcT)の精製を試みた。ウシ泌乳期乳腺のミクロソーム画分を可溶化し、種々のアフィニティーカラムを通して酵素を部分精製した。その結果最終画分に分子量80Kを主とする4本のバンドが得られたので、どのタンパク質バンドが酵素活性をもつかどうかを解析している。またこの遺伝子をクローニングするため、GalNAcTと同じ基質に異なる糖を転移しその遺伝子がクローニングされているβ-1,4-ガラクトース転移酵素(GalT)とβ-1,4-N-アセチルグルコサミン転移酵素の間で見られるホモロジーを基に、ウシ乳腺mRNAから3′-RACE法を行なった。その結果430bpのクローンが得られ、このクローンは推定アミノ酸配列からウシGalTと38%の、また遺伝子バンク登録のヒトGalTに高い相同性をもつ遺伝子断片と77%の相同性を示した。このクローンは何らかの糖転移酵素やそれに関連した分子をコードしている可能性が考えられ、現在さらに解析を進めている。

We have analyzed the structure of the Asn-type sugar lock in the sugar chain derived from breast epithelial cells. This sugar chain contains N-Acyclovir (GalNAc) and is extremely precious. This sugar lock is also found to increase the functional differentiation and integration of breast tissue. In this paper, we analyzed the structure of carbohydrate chain in breast cancer tissue, and found that the same phenomenon occurred in breast cancer cells, and the tendency of carbohydrate chain to increase was observed. Objective: To explore the regulatory mechanism of N-linked glycosylation in the functional differentiation and carcinogenesis of breast epithelial cells, and to refine β-1,4-N-linked glycosylation enzyme (GalNAcT). During lactation, the mammary gland is dissolved, and the seed is partially refined. The results showed that the molecular weight of 80K was mainly determined by the analysis of enzyme activity. The β-1,4-GalNAcT and β-1,4-N-GalNAcT method was used to detect the presence of a protein in the breast. As a result, the 430bp fragment was found to have a high identity of 38% and 77% in the estimated nucleotide sequence. The sugar transfer enzymes in this study are related to the molecular structure of the enzyme.

项目成果

Akimoto, Y.: "Immunocytochemical localization of the protein reactive to human β-1,4-galactosyltransferase antibodies during chick embryonic skin differentiation." Anatomical Record. 243. 109-119 (1995)

Akimoto, Y.：“鸡胚胎皮肤分化过程中与人 β-1,4-半乳糖基转移酶抗体反应的蛋白质的免疫细胞化学定位。” 243. 109-119 (1995)。

Taka, J.: "Bovine pituitary membrane glycoproteins contain β-N-acetylgalacto-saminylated N-linked sugar chains." J. Neurochem.66. 852-859 (1996)

Taka, J.：“牛垂体膜糖蛋白含有 β-N-乙酰半乳糖氨基化 N-连接糖链。”J. Neurochem.66 (1996)。

Shirane, K.: "Effects of N-3554S, a polyprenyl phosphate, on B16-F10 mouse melanoma cells." Biochim. Biophys. Acta. 1268. 285-292 (1995)

Shirane, K.：“N-3554S（一种聚异戊二烯磷酸酯）对 B16-F10 小鼠黑色素瘤细胞的影响。”

Bhavanandan, V. P.: "Biology of the Sialic Acids" Plenum Publishing Corp., New York, 378 (1995)

Bhavanandan，V.P.：“唾液酸生物学”Plenum Publishing Corp.，纽约，378 (1995)

古川 清: "病理と臨床13" 文光堂,東京, 179 (1995)

古川清：《病理学和临床 13》文库堂，东京，179（1995）