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標的遺伝子組換えによる微小管関連蛋白欠失マウスの作製とその分子細胞生物学的解析

通过靶向基因重组产生微管相关蛋白缺陷小鼠及其分子和细胞生物学分析

基本信息

批准号：
07260203
负责人：
原田彰宏
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07260203/
关键词：
標的組換え法微小管関連蛋白 MAP1B シナプシン1 DiI LTP

项目摘要

1.我々は標的遺伝子組換え法によって、微小管関連蛋白(MAPs)(神経細胞特異的に存在し、微小管に結合してその重合を調節する蛋白)の遺伝子のうち、MAP1B遺伝子欠失マウスの作製に成功しその解析を行ったところ,ホモ接合型マウスは生存することができるが,野生型に比べ体重減少,筋力低下が明らかとなった。組織学的解析の結果,視神経において発達不全が認められ,電子顕微鏡による解析によっても軸索内の微小管の構成の異常等がみられた。MAP1B蛋白欠失マウスにおいては,Tau蛋白の増加がみられるため,Tau蛋白がMAP1B蛋白の機能を代償している可能性が考えられる。現在我々は,Tau蛋白欠失マウスとMAP1B蛋白欠失マウスの交配を行っているところである。広義の微小管関連蛋白であるシナプシン1はシナプス小胞の近傍に存在する蛋白であり,シナプス小胞からの神経伝達物質の放出を調節していると考えられている。又、シナプス形成自体にも重要であることが示されている。我々は標的遺伝子組換え法によってシナプシン1欠失マウス系統の作製、解析を行い、以下のような結果を得た。(1)海馬CA3部及び小脳分子層のシナプスにおいてシナプス小胞の数及び密度が減少していた。またシナプス小胞に分布する蛋白であるシナプトフィジンが減少していた。(2)シナプス小胞の減少はシナプスのactive zoneから遠くなるほど顕著にみられた。(3)海馬CA3部シナプスにおいてはシナプス前部の面積が減少しており,その結果はDiIをもちいても確認された。(4)急速凍結ディープエッチ法により,シナプス小胞間の架橋の減少が観察された。(5)海馬CA3部シナプスにおけるLTPには影響が認められなかった。以上のように、シナプスの形成及び構造の維持におけるシナプシン1の役割が初めて明らかになった。今後我々は初代培養細胞等を用いたシナプス伝達の電気生理学的解析や変異マウスの行動学的解析等を行う予定である。

1. The expression of MAPs, MAP, MAPs (proteins that regulate the presence and binding of microtubules in neurons), MAP, MA The results of histological analysis showed that the microtubule in the axon was abnormal due to incomplete recognition of the microtubule in the axon. MAP1B protein deficiency,Tau protein increase,Tau protein function compensation possibility. Now,Tau protein is missing. MAP1B protein is missing. Microtube-associated protein 1 is present in the vicinity of microtube-associated protein 1 and regulates the release of neurotransmitter substances from microtube-associated protein 1. And, because it's important, it's important. The system is implemented, analyzed, and the following results are obtained. (1)The number and density of cells in hippocampus CA3 and microcellular layer decreased. The distribution of small cells is reduced. (2)The number of cells in the active zone is reduced. (3)The area of hippocampus CA3 was reduced and the result was confirmed. (4)The rapid freezing method reduces the bridging between cells. (5)Hippocampus CA3 part is affected by LTP. The formation and maintenance of the above structures are discussed in detail below. In the future, we will conduct a predetermined study on the application of primary culture cells to the analysis of electrophysiology and kinetics.