アポトーシス制御遺伝子産物Bc1-2ファミリータンパク質の高次構造

凋亡调节基因产物Bc1-2家族蛋白的高级结构

• 批准号: 07268220
• 负责人: 太田 成男
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07268220/
• 关键词: アポトーシス; Bcl-x; Bcl-2ファミリー; Bax; 大量発現; X線結晶解析

アポトーシス制御因子Bcl-xの高次構造を解明する目的でラットBcl-xを大腸菌で大量に発現させ、蛋白質として均一になるまで精製した。T7プロモーター下流にラットBcl-xcDNAを接続し、lacプロモーター下流に接続したT7RNAポリメラーゼ遺伝子を発現させ、Bcl-xを大量に発現させた。精製は、hydrophobicカラム、分子ふるいカラム、MonoQカラムによって精製した。均一に精製した蛋白質を結晶化し、X線結晶解析は現在進行中である。Bcl-xはそれ自身でダイマーを形成し、あるいは他のBcl-2ファミリーのメンバーをヘトロダイマーを形成する。ダイマー形成に必要な領域を決定し、N末端側の50アミノ酸のペプチドだけでダイマーを形成することを明らかにした。Bcl-2ファミリー蛋白質のなかでアポトーシスを促進する因子Baxを大腸菌でわずかな量を発現させると大腸菌は小さなコロニーしか形成しなかった。そこで、Baxは動物細胞だけでなく、大腸菌に対しても細胞障害性を示すことが考えられた。また、アポトーシスを抑制するBcl-xを同時に発現させるとその細胞障害性は抑制したので動物細胞のアポトーシスの少なくとも一部は反映していることが推定された。その細胞障害性を示すBaxを領域を決定した。その領域はBcl-2ファミリーに相同性のあるBH1領域とBH2領域に挟まれた領域であった。そこで、Baxのアポトーシス促進能はBH1領域とBH2領域に挟まれた領域でBcl-2やBcl-xによってその働きが抑えられるためにアポトーシスを抑制するものと考えられた。

アポトーシスControl factor Bcl-xのHigher order structureを Explain the purpose of でラットBc l-x contains a large amount of coliform bacteria and a refined protein that is uniform and refined. T7 プロモーターIndecent Bcl-xcDNAを涚し、lacプロモーターIndecent The T7RNA is the same as the original one. Refined, hydrophobic, molecular, MonoQ refined. Uniform purification, crystallization of proteins, and X-ray crystallization analysis are currently in progress. Bcl-xはそれ itselfでダイマーをformationし、あるいは他のB cl-2ファミリーのメンバーをヘトロダイマーを form する. Necessary area for ダイマーformation is determined, N terminal side 50アミノAcid のペプチドだけでダイマーをforms することを明らかにした. Bcl-2 ファミリーprotein のなかでアポトーシスをpromotes するfactor Baxを大Enterobacteriaceae でわずかな を発 appear させると coliform は さなコロニーしか Formation しなかった.そこで, Bax は animal cells だけでなく, coliform に対してもcytotoxicity をshow すことが考えられた.また, アポトーシスを inhibits するBcl-xを and に発appears させるとその inhibits cell damageしたのでAnimal Cellのアポトーシスの小なくとも一は Reflects していることが presumed された. The cytotoxicity of the cells indicates that the Bax area is determined.その地はBcl-2ファミリーにidentityのあるBH1 domain とBH2 domain に挟まれた区であった.そこで, Bax のアポトーシス can promote the BH1 field and the BH2 field and the Bcl-2 fieldやBcl-xによってその働が suppresses えられるためにアポトーシスを inhibits するものと卡えられた.

项目成果

Venaba, R., Ohta, S. et. al.: ":Increased Expression of Carnitine Palmitoyltransferase I Gene is Repressed by Administering L-Carnitine-Deficient Juvenile Visceral Steatosis Mice." J. Biochem.(in press). (1996)

Venaba，R.，Ohta，S. 等。

太田成男: "ミトコンドリア脳筋症" 病理と臨床. 増刊号(印刷中). (1996)

N. Ota：“线粒体脑肌病”病理学和临床实践特刊（1996 年出版）。

Sohma, O., Ohta, S. et. al.: ":High expression of Bcl-x protein in the developing human cerebellar cortex." J. Neurosci. Res.(in press). (1996)

Sohma，O.，Ohta，S.等。

Mizuguchi, M., Ohta, S. et. al.: ":Immunochemical and immunohistochemical localization of Bcl-x protein in the rat central nervous system." Brain Res.(in press). (1996)

水口，M.，太田，S.等。

麻生定光、太田成男: "bcl-2ファミリーと細胞死" Dimentia. 9. 368-375 (1995)

Sadamitsu Aso、Shigeo Ota：“Bcl-2 家族和细胞死亡”Dimentia 9. 368-375 (1995)。