アポトーシス制御因子Bcl-2ファミリーの高次構造の解明

阐明凋亡调节因子 Bcl-2 家族的高级结构

• 批准号: 08260219
• 负责人: 太田 成男
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08260219/
• 关键词: Bcl-2ファミリー; Bcl-x; アポトーシス; X線結晶解析; Bax; 脱アミド

アポトーシス制御因子Bcl-xの高次構造を解明する目的でラットBcl-xを大腸菌で大量に発現させ、蛋白質として均一になるまで精製した。T7プロモーター下流にラットBcl-xcDNAを接続しlacプロモーター下流に接続したT7RNAポリメラーゼ遺伝子を発現させBcl-xを大量に発現させた。精製は、DEセルロースカラム、hydrophobicカラム、分子ふるいカラム、MonoQカラムによって精製した。MonoQカラムでは精製されたBcl-xは2本のバンドを示した。それぞれのバンドを示す蛋白質を均一に精製し結晶化した。そしてX線結晶解析を行ない、ついに立体構造を明らかにすることに成功した。基本的には、変性ヒトBcl-xを再生させて得た試料を用いて解析したFesikらの結果と同一であったがBcl-2ファミリー間でダイマーを形成するのに必要な領域BH2ドメインに違いがあった。Bcl-xの2本のバンドはAsn-Glyの配列のAsn残基の脱アミドによって生じることが判明した。Bcl-xにはAsn-Glyの配列が3箇所あり、少なくとも一箇所はBH2ドメインに存在するAsn-Gly配列は脱アミド化されていない。FesikらはBH2ドメインのAsn-Gly-Glyの配列は異常な構造をとっていると記載あれているが、私たちの決定した構造では特に異常な構造はとっていない。彼等の試料は変性再生の過程をへて精製されたので、BH2領域の脱アミドが生じた可能性が高い。したがって、解析に要した時間はかかったが、正確な立体構造を提出することができた可能性が高い。ついで、アポトーシスを促進するBaxの致死領域を決定した。この領域ではマウス細胞にアポトーシスを誘導した。また、アポトーシス誘導活性をもつ最小構造ではBcl-2によってアポトーシスの抑制が見られないことから、Bax自身にアポトーシス誘導活性があることが推定された。

アポトーシスControl factor Bcl-xのHigher order structureを Explain the purpose of でラットBc l-x contains a large amount of coliform bacteria and a refined protein that is uniform and refined. T7 プロモーターdegradable にラットBcl-xcDNAを Continue 続しlacプロモーターdegradableに涚したT7RNAポリメラーゼ弝子を発appears させBcl-xをa large amount of に発appears させた. Refined は, DE セルロースカラム, hydrophobic カラム, molecular ふるいカラム, MonoQ カラムによって refined した. MonoQカラムではRefinedされたBcl-xは2本のバンドをshowした. The protein is uniformly refined and crystallized. The results of X-ray crystallography analysis and three-dimensional structure analysis were successful. Basic test, change of nature, Bcl-x, regeneration, test sample, analysis by tester, Fesik test result, the same result.あったがBcl-2ファミリー间でダイマーを Formation するのにNecessary area BH2 ドメインにviolation いがあった. Bcl-xの2本のバンドはAsn-GlyのalignmentのAsn residueの出アミドによって生じることが clarificationした. Bcl-xにはAsn-Glyの配arrayが3箇所あり、小なくとも一箇士はBH2 ドメインに presence and Asn-Gly arrangement and removal of アミド化されていない. FesikらはBH2ドメインのAsn-Gly-Glyのalignmentはabnormalなstructureをとっているとrecord あれているが, private たちのdetermination したstructure では特に abnormal なstructure はとっていない. The process of regeneration of these samples is very refined, and the possibility of detoxification in the BH2 field is very high.したがって, analysis is necessary, time is はかかったが, correct 3D structure is proposed, and the probability is high.ついで、アポトーシスをPromote the death area of ​​するBaxのdeterminationした. The field of ではマウスcells and にアポトーシスをinduced した.また, アポトーシスinducing activity をもつ minimal structure ではBcl-2 によってアポトーシスの suppress Preparation of the が见られないことから, Bax itself にアポトーシスinducing activity があることがESTIMATE された.

项目成果

若尾りか,太田成男: "アポトーシスとレドックス調節" 神経研究の進歩, 9 (1996)

Rika Wakao、Shigeo Ota：“细胞凋亡和氧化还原调节”神经学研究进展，9 (1996)

Uenaka R.,Ohta S.et al.: "Increased Expression of Carnitine Palmitoyltransferase I Gene is Repressed by Administering L-Carnitine in the hearts of Carnitine-Deficient Juvenile Visceral Steatosis Mice." J.Biochem.119. 533-540 (1996)

Uenaka R.、Ohta S.等人：“在缺乏肉碱的幼年内脏脂肪变性小鼠的心脏中施用左旋肉碱可抑制肉碱棕榈酰转移酶 I 基因表达的增加。”

太田成男: "ミトコンドリアの生化学" 「ミトコンドリア病」(埜中征哉,後藤雄一編)医学書院(印刷中), (1997)

太田繁雄：《线粒体生物化学》《线粒体疾病》（野中诚哉和后藤雄一编辑）医学书院（出版中），（1997 年）

Shiraiwa N.,Ohta S.et al.: "An additional form of rat Bcl-x.,Bcl-xβ,generated by an unspliced RNA,Promotes apoptosis in promyeloid cells." J.Biol Chem.271(22). 13258-13265 (1996)

Shiraiwa N.、Ohta S. 等人：“由未剪接的 RNA 生成的大鼠 Bcl-x.、Bcl-xβ 的另一种形式，促进早幼粒细胞凋亡。J.Biol Chem.271(22) . 13258 -13265 (1996)

Sohma O.,Ohta,S.et al.: "High expression of Bcl-x protein in the developing human cerebellar cortex." J.Neurosci Res.43(2). 175-182 (1996)

Sohma O.,Ohta,S.et al.：“Bcl-x 蛋白在发育中的人类小脑皮质中高表达。”