血球幹細胞の増殖・分化における転写因子PEBP2の機能-doniraut negetive mutartを用いた解析-

转录因子PEBP2在血细胞干细胞增殖和分化中的功能-使用doniraut阴性突变进行分析-

基本信息

批准号：
07269202
负责人：
佐竹正延
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

〈1〉PEBP2αB遺伝子のドミナント・ネガティブ変異体を導入したマウスの作出転写因子のドミナント・ネガティブ変異体は、当該転写因子の機能を、そのDNA結合また転写活性化のレベルで阻害する。個体レベルでドミナント・ネガティブ変異体を造血組織特異的に発現させることにより、血球細胞の増殖・分化における転写因子の役割を解析できる。本研究では以上の利点をふまえ、β-アクチン・プロモーター制御下においたPEBP2αB/AML遺伝子のドミナント・ネガティブ変異体を、マウス個体の造血組織で発現させるというアプローチにより当該転写因子の機能を探ろうとして行われた。トランスジェニック・マウスは3系統を作出することができた。またノーザン解析によりトランスジーンの発現を確認した。現在各系統における血球細胞の増殖・分化の動態をFACS等の手段により解析している段階である。〈2〉Tリンパ球の増殖とPEBP2αB遺伝子の発現マウス脾細胞をConA存在下で培養すると、約24hr後に^3H-TdRの酸不溶性分画への取り込みでみた、DNA合成が開始する。休止期にある脾Tリンパ球でもPEBP2αB転写産物は認められるが、ConA刺激によりその量が著明に増大する。またこの増大は、DNA合成開始・c-myb転写産物量の増大に先行して認められる。さらに蛋白合成阻害剤であるシクロヘキシミドをConAと共存させても、PEBP2αB転写産物の増大が認められた。従ってT細胞受容体(TCR)からのシグナルが、PEBP2αB遺伝子の発現誘導を惹起するものと推測された。

<1>在PEBP2αB基因的显性阴性突变体引入的小鼠中的显性阴性突变体在DNA结合和转录激活的水平上抑制转录因子的功能。通过在个体水平上特异性表达显性阴性突变体，可以分析转录因子在血细胞增殖和分化中的作用。考虑到这些优势，这项研究试图通过使用一种方法在β-肌动蛋白启动子控制下的PEBP2αB/AML基因的显性阴性突变体在小鼠个体的造血组织中表达。转基因小鼠能够产生三种菌株。此外，北部分析证实了转基因的表达。当前，通过诸如FACS之类的方式分析了每个谱系中血细胞增殖和分化的动力学。当小鼠脾细胞在CONA存在下培养小鼠脾细胞时，T淋巴细胞的增殖并表达PEBP2αB基因，DNA合成大约24小时后开始，如将 ^3H-TDR掺入酸 - 弹药球的分数中所见。 PEBP2αB转录本在端基相脾淋巴细胞中也发现，但在CONA刺激后，量显着增加。在启动DNA合成和C-MYB转录本量的增加之前，还可以观察到这种增加。此外，即使在蛋白质合成抑制剂的环己酰亚胺也与CONA并存，观察到PEBP2αB转录本的增加。因此，据推测来自T细胞受体（TCR）的信号诱导PEBP2αB基因的表达诱导。