血球幹細胞の増殖・分化における転写因子PEBP2の機能-doniraut negetive mutartを用いた解析-

〈1〉PEBP2αB遺伝子のドミナント・ネガティブ変異体を導入したマウスの作出転写因子のドミナント・ネガティブ変異体は、当該転写因子の機能を、そのDNA結合また転写活性化のレベルで阻害する。個体レベルでドミナント・ネガティブ変異体を造血組織特異的に発現させることにより、血球細胞の増殖・分化における転写因子の役割を解析できる。本研究では以上の利点をふまえ、β-アクチン・プロモーター制御下においたPEBP2αB/AML遺伝子のドミナント・ネガティブ変異体を、マウス個体の造血組織で発現させるというアプローチにより当該転写因子の機能を探ろうとして行われた。トランスジェニック・マウスは3系統を作出することができた。またノーザン解析によりトランスジーンの発現を確認した。現在各系統における血球細胞の増殖・分化の動態をFACS等の手段により解析している段階である。〈2〉Tリンパ球の増殖とPEBP2αB遺伝子の発現マウス脾細胞をConA存在下で培養すると、約24hr後に^3H-TdRの酸不溶性分画への取り込みでみた、DNA合成が開始する。休止期にある脾Tリンパ球でもPEBP2αB転写産物は認められるが、ConA刺激によりその量が著明に増大する。またこの増大は、DNA合成開始・c-myb転写産物量の増大に先行して認められる。さらに蛋白合成阻害剤であるシクロヘキシミドをConAと共存させても、PEBP2αB転写産物の増大が認められた。従ってT細胞受容体(TCR)からのシグナルが、PEBP2αB遺伝子の発現誘導を惹起するものと推測された。

〈1〉PEBP2αB遺伝子のドミナント・ネガティブ変異体を導入したマウスの作出転写因子のドミナント・ネガティブ変異体は、当該転写因子の機能を、そのDNA結合また転写活性化のレベルで阻害する。個体レベルでドミナント・ネガティブ変異体を造血組織特異的に発現させることにより、血球細胞の増殖・分化における転写因子の役割を解析できる。本研究では以上の利点をふまえ、β-アクチン・プロモーター制御下においたPEBP2αB/AML遺伝子のドミナント・ネガティブ変異体を、マウス個体の造血組織で発現させるというアプローチにより当該転写因子の機能を探ろうとして行われた。トランスジェニック・マウスは3系統を作出することができた。またノーザン解析によりトランスジーンの発現を確認した。現在各系統における血球細胞の増殖・分化の動態をFACS等の手段により解析している段階である。〈2〉Tリンパ球の増殖とPEBP2αB遺伝子の発現マウス脾細胞をConA存在下で培養すると、約24hr後に^3H-TdRの酸不溶性分画への取り込みでみた、DNA合成が開始する。休止期にある脾Tリンパ球でもPEBP2αB転写産物は認められるが、ConA刺激によりその量が著明に増大する。またこの増大は、DNA合成開始・c-myb転写産物量の増大に先行して認められる。さらに蛋白合成阻害剤であるシクロヘキシミドをConAと共存させても、PEBP2αB転写産物の増大が認められた。従ってT細胞受容体(TCR)からのシグナルが、PEBP2αB遺伝子の発現誘導を惹起するものと推測された。