血球幹細胞の増殖・分化における転写因子PEBP2の機能

转录因子PEBP2在血细胞干细胞增殖分化中的作用

基本信息

批准号：
08261201
负责人：
佐竹正延
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はこれまでに、DNA結合能を有するαサブユニット、及びαとヘテロダイマーを形成しそのDNA結合能を促進するβサブユニットの、2つのサブユニットから成る新しい転写因子PEBP2について、それらをコードするマウス遺伝子を単離し、その構造・機能を解析してきた。一方ヒト急性骨髄性白血病(AML)のM4型でみられる、inv16 (p13q22)の転座点には、キメラ遺伝子PEBP2β/SMMHCが形成されることから、PEBP2β遺伝子がAMLのプロトオンコジンであるとの性格づけがなされた。本研究はPEBP2β遺伝子の機能を破壊した。ターゲティング・マウスの表現型を解析することにより、血球幹細胞の増殖・分化におけるPEBP2転写因子の機能を明らかにする目的で行われた。先ずPEBP2β蛋白の翻訳開始Metコドンを含む、第1エクソンを欠失させた相同組換えES細胞クローンを得た。ES細胞をマウス初期胚に戻しキメラ・マウスを、さらにPEBP2β(+/-)のヘテロマウスを得る事ができた。ヘテロマウスは特に異常なく発生し成長した。一方PEBP2β(-/-)のホモ個体は脳室内への出血を伴い、12.5日令で胎生致死となる。またプリミティブな赤血球は認められるが、肝におけるデフイニテイブな造血像は殆ど認められない。肝造血の欠如は、肝組織切片のHE染色標本・肝組織スタンプ・スミアのMG染色標本で何れの系統の血球をも認めないことから明らかである。また12.5日令のPEBP2β(-/-)肝より細胞を採取し、デフイニテイブな造血を促す栄養条件下でin vitroのコロニー形成法を行っても、赤血球系・骨髄球系・混合型の何れのコロニーをも検出できなかった。以上の観察はPEBP2β遺伝子が、おそらくは造血幹細胞のレベルで、その発生・増殖・分化に必須の遺伝子として働いていることを示唆している。PEBP2転写因子のαサブユニットをコードするAML1遺伝子欠損個体もまた、類似の表現型を示すことが報告されている。デフイニテイブな造血の発生において、PEBP2転写因子のα・βサブユニットは必須かつ等価の機能を果たしていると考えられる。

我们先前已经分离了编码新型转录因子PEBP2的小鼠基因，这是两个亚基的新转录因子：具有DNA结合能力的α亚基和形成具有α异二聚体的β亚基，并促进其DNA结合能力，并分析了小鼠基因的结构和功能。另一方面，在M4类型的人类急性髓样白血病（AML）中看到的嵌合基因PEBP2β/SMMHC是在INV16（P13Q22）的易位点形成的，并且PEBP2β基因被描述为AML的ProtoonCodin。这项研究破坏了PEBP2β基因的功能。通过分析靶向小鼠的表型，进行了阐明PEBP2转录因子在血细胞干细胞增殖和分化中的功能。首先，获得了一个含有PEBP2β蛋白的翻译起始的同源重组ES克隆，其中删除了第一个外显子。将ES细胞返回到早期的小鼠胚胎中，还获得了嵌合小鼠，并获得了PEBP2β（+/-）杂音小鼠。杂物小鼠发展并成长而没有任何特殊的异常。另一方面，同源PEBP2β（ - / - ）个体患有脑室室内出血，导致12.5天的胎儿死亡。此外，观察到原始的红细胞，但是肝脏几乎没有任何明确的造血图像。由于缺乏血细胞在肝组织切片，肝组织邮票和涂抹MG染色的标本中，缺乏血细胞的缺乏，因此缺乏肝脏。此外，从PEBP2β（ - / - ）肝脏中收集细胞，并在营养条件下在体外进行定植，以促进缺乏造血，但无法检测到红细胞，骨髓细胞或混合类型的菌落。上述观察结果表明，PEBP2β基因是其发育，增殖和分化的必不可少的基因，大概是在造血干细胞水平上。还报道了编码PEBP2转录因子α亚基的AML1基因缺乏的个体也据报道表现出相似的表型。在不足的造血剂的发展中，PEBP2转录因子的α-β亚基被认为具有必不可少的等效功能。