ヘルペスウイルスベクターによるグルタミン酸受容体の遺伝子発現とその制御機構の解析

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我々は従来より、バキュロウイルスベクター・昆虫培養細胞系を用いてAMPA型及びNMDA型グルタミン酸受容体チャネルサブユニットの発現系を構築し、その分子的、機能的解析を行ってきている。しかるに、個体脳を含んだ神経系細胞に感染・発現できる本HSV系により更にその解析を進めるため、NMDA受容体εファミリーサブユニットについてHSV系を構築し、解析しつつある(分子生物学会年会発表(1994年、1995年)、FEBS Meeting発表予定(スペイン、1996))。ε1及びε2サブユニットcDNAをパッケージング用ベクタープラスミド(amplicon plasmid)のCMVプロモーターの下流に組み込み、組換え型HSVを作製した。まず、得られたウイルスについてRT-PCR、ドットブロットを行いDNAの組み込まれていることを確認した。次に、Vero細胞に感染させ、ウェスタンブロットを行い、それらの発現を確認できた。発現した本受容体について生化学的な解析を行うと共に、本ウイルスを用いて、それらのノックアウトマウスも含め、in vivoでの感染実験を計画している。更に、遺伝子の転写開始点より5'上流域をβ-ガラクトシダーゼ・レポーター遺伝子の上流につなぎ、個体における遺伝子発現制御を調べる、いわゆるin vivoプロモーター解析は従来、トランスジュニックマウス等を用いて行われてきたが、本HSV系を用いて、個体脳内in vivoプロモーター解析を行うべく、NMDA型ζ1サブユニット等の遺伝子5'上流域をβガラクトシダーゼ・レポーター遺伝子の5'上流につないだHSVクローンを構築し、PC12細胞を用いて解析を進めている。更に、脳の悪性腫瘍に対する遺伝子治療用ベクターの可能性も視野に入れ、インターフェロンγ、インターロイキン2の本HSV系を構築し、検討している。