ランダム変異を用いたリゾチームのフォルディング情報の解析

使用随机突变分析溶菌酶折叠信息

• 批准号: 07280221
• 负责人: 井本 泰治
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07280221/
• 关键词: リゾチーム; フォルディング; ランダムライブラリー

蛋白質のフォルディングの情報を解読する目的で以下の実験を行った。(1)巻き戻り現象を明確に把握するために、巻き戻しの基本的方法論を確立した。(2)ランダム変異体を能率良く確実に選び出すために、ストレプトマイシン依存性の菌を用いて100%リゾチーム遺伝子が入った大腸菌のみをポジディイブ選択できる系を確立した。(3)リゾチームをいくつかの領域に分けて平均1個の変異が入るようなランダムオリゴヌクレオチドを張り付けてランダム変異体を作製する。酵母の分泌系でリゾチームを分泌しないもをまずは選び出す。第一選択はリゾチーム活性による溶菌斑を示さないものを選ぶ。次いで少量培養後、ELISAでリゾチームが全く分泌されないものに絞り込む。この段階でDNA配列を解析する。さらにこのリゾチーム遺伝子を大腸菌の発現系に移して発現させ、巻き戻り効率を検討する。以上の解析系を確立した。(4)リゾチームの約1/3の領域について5000個以上の変異体の選択を完了した。現在のところ目的の変異体としては、2個以上の変異が入ったものしか捕まっていない。単一変換体に戻して、これら1個ずつの変換の重要性を検討している。一方、巻き戻りに関して決定的と思われる変換を意図的に施して解析することにより、情報を増やす研究も強力に押し進めている。

The purpose of protein analysis is as follows: (1)The basic methodology for understanding and understanding the phenomenon is established. (2)The ability to select and use 100% of the bacteria depends on the ability to select and use the bacteria. (3)The average number of changes in the field is 1. The number of changes in the field is 1. The number of changes in the field is 1. Yeast secretion system is very important. The first option is to select from the list of active plaques. After a small amount of culture, ELISA is used to secrete the whole body. DNA sequence analysis of this segment. This article discusses the development of E. coli and its efficiency. The above analysis system is established. (4)About 1/3 of the field has more than 5000 different types of selection. Now, there are more than 2 different types of objects in the target area. The importance of a single change is discussed. A party, a group of people, a group of people

项目成果

Maeda, Y., et al.: "Effective ranaturation of denatured and reduced immunoglabnulin G in vitrob without assistance of chaperone" Protein Engineering. 9(inpress). (1996)

Maeda, Y. 等人：“在没有伴侣的帮助下，在体外有效变性和还原的免疫球蛋白 G”蛋白质工程。

Tomizawa, H., et al.: "Stabilization of lysozyme against irreversible inactivation by suppression of chemical reaction" The Jouranal of Biochemistry. 117. 635-640 (1995)

Tomizawa, H. 等人：“通过抑制化学反应来稳定溶菌酶，防止不可逆失活”《生物化学杂志》。

Tomizawa, H., et al.: "Stabilization of lysozyme against irreversible inactivation by alterations of Asp-Gly sequences" Protein Engineering. 8. 1023-1028 (1995)

Tomizawa, H. 等人：“通过改变天冬氨酸-甘氨酸序列来稳定溶菌酶以防止不可逆失活”蛋白质工程。

Ueda, T., et al.: "Stabilization of lysozyme by introduction N-glycosylation signal sequence" The Journal of Biochemistry. 119. 157-161 (1996)

Ueda, T. 等人：“通过引入 N-糖基化信号序列稳定溶菌酶”《生物化学杂志》。

Ueda, T., et al.: "Kinetically trapped structure in the reraturation of reduced oxindcle alanine 62 lysozyme" Biochemistry. 34. 16178-16185 (1995)

Ueda, T., et al.：“还原性丙氨酸 62 溶菌酶重新恢复中的动力学捕获结构”生物化学。