权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

分断型アラニンラセマーゼの分子構造形成における細胞内マトリツクスの相互作用

丙氨酸消旋酶碎片分子结构形成中的细胞内基质相互作用

基本信息

批准号：
07229229
负责人：
左右田健次
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

好熱菌由来のアラニンラセマーゼのサブユニットは、2次構造予測から2つのドメインよりなるものと推測される。両ドメインを遺伝子工学的に別々に発現させた場合、補酵素PLPを結合部位を含む、N-末端ドメインタンパク質(N-フラグメント)がinclusion bodyを形成して宿主大腸菌の不溶性の画分に回収されたのに対して、C-フラグメントは発現しなかった。しかし両者を異なるベクター上で共発現させた場合には、α2β2構造を持ち、野生型酵素の約50%の活性を示す分断型酵素が得られた。また大腸菌由来の分子シャペロンであるgroESLを共発現させた場合にはN-フラグメントは宿主E. coliの可溶性画分にえられ、ラセマーゼ活性を示した。またin vitroにおける変性N-フラグメントのリフォルディングを検討したところ、C-フラグメントまたはシャペロンGroESLとともにリフォルディングさせた場合のみラセマーゼ活性を示した。以上の結果はアラニンラセマーゼにおいてはN-末端ドメインがその活性発現に関与し、C-末端ドメインは酵素のフォルディングを助けるいわば分子内シャペロンとして働いていることを意味する。X線解析による立体構造解析の結果では、本酵素のサブユニットは大小2つのドメインから形成されるが、そのヒンジ部分の位置は予想されたドメイン領域より20残基程度N-末端側に位置した。予想されたN-末端ドメインはα,β-バレル構造をもつコアの部分と一対の逆平行β構造をもつ領域からなり、補酵素PLPはα, β-バレル構造の中心に位置している。C-末端ドメインはN-末端ドメインの突きだした部分に巻き付くように存在する。PLPを中心とする活性部位近傍には、C-末端ドメインに属する残基はほとんど存在せず、N-末端ドメインがラセマーゼの活性発現に関与するという本研究で結果を支持した。

The origin of heat-loving bacteria: のアラニンラセマーゼのサブユニットは, 2 times Structure predictionから2つのドメインよりなるものとspeculationされる.両ドメインを伝子工学的に比々に発成させた occasion, supplement enzyme PLP を binding site をInclusion of N-terminal ドメインタンパクBody を formed by host coliform insoluble のpainting に recovery されたのに対して, C-フラグメントは発appears しなかった. The しかし両 is the same as the でなるベクター上で合発成させたoccasion には, the α2β2 structure をhold ち, and the wild-type enzyme の about 50% of the activity をshows the cleavage type enzyme がget られた.また coliform originのmoleculeシャペロンであるgroESLを同発appearsさせたoccasionにはN-フラグメントはhost E. The solubility of coli is divided into soluble and active.またin vitroにおける変性N-フラグメントのリフォルディングを検したところ、C-フラグメントまたはシャペロンGroESLとともにリフォルディングさせたoccasionのみラセマーゼActiveをshowした. The above results show that the active N-terminal N-terminal active terminal and C-terminal terminalメインはzyme のフォルディングをhelp けるいわば intramolecular シャペロンとして働いていることを means する. The result of X-ray analysis and three-dimensional structure analysis is that the enzyme is formed in size 2 The position of the れるが, the そのヒンジ part is the position of the されたドメイン domain and the degree of the N-terminal side of the 20 residues. Yuxiang されたN-terminal ドメインはα, β-バレルstructure をもつコアのpart と一対のantiparallel β structure をもつ domain からなり, supplement enzyme PLP はα, The center and position of the β-バレル structure are the same. C-Terminal ドメインはN-Terminal ドメインの出きだしたPart に巻きpaid くようにexistent する. The central active site of PLP is close to the active site, and the C-terminal active site is close to the residue.ず, N-terminal ドメインがラセマーゼのActivity is now present and the results of this study are supported by するという.