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カルシウム結合部位を導入したニワトリリゾチーム変異体を用いた再生初期構造の形成要因の解明

使用引入钙结合位点的鸡溶菌酶突变体阐明再生初始结构的形成因素

基本信息

批准号：
10157218
负责人：
井本泰治
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リゾチームと高次構造において高い相同性を持つα-ラクトアルブミン(LAと略す)のCa結合領域をリゾチームの82から92のループ領域にそっくり導入した変異体を調製し、そのリゾチーム変異体(CaBリゾチームと略す)の還元状態からの再生過程に及ぼすCaの影響を評価した。変異を施したCaBリゾチームのtransformantを酵母を用いて発現させ、カチオン交換樹脂を用いた精製により目的物を得た。このCaBリゾチームを一旦還元し、Ca非存在下(2mMEDTA存在下)とCa存在下(2mMCaCl存在下)で、メルカプトエタノール-酸化型グルタチオンの系で経時的な再生を追跡した。明らかにCa存在下では、再生速度が速いことから、Caが存在すると導入したCa結合部位が速やかに形成することがわかった。一方、CaBリゾチームは酵母より発現すると収率が悪いので、大腸菌を用いた発現を行い、効率的に変性還元CaBリゾチームを得るために、N末端にSerが付加するようにデザインした(Ser^<-1>リゾチーム)。CaB Ser^<-1>リゾチームの濃度依存性はCa非存在下(2mMEDTA存在下または2mMCa存在下)では、peudo野生型(Ser^<-1>リゾチーム)のそれに比べ、濃度上昇に伴って大きく低下した。しかし、100mMのCa存在下では、CaB Ser^<-1>リゾチームの再生収率は、peudo野生型のそれに比べ、濃度上昇に伴ってもあまり低下せず、効率的な再生が起こっていることがわかった。そこで、100μMのCaB Ser^<-1>リゾチーム濃度における再生収率を種々のCa濃度の下で行った結果、Ca濃度に対する再生収率はシグモイド曲線となり、その中点のCa濃度は約35mMであった。再生の初期段階で構造形成とアグリゲーションが競合することがしられていることから、この結果は、再生開始のごく初期の段階でリゾチームの82から92のループ領域がランダムとは異なる構造(しかし、遷移状態の構造よりは緩い)をとることを意味している。

In this paper, the high-quality data acquisition system (LA) is used to combine the Ca with the field data in the same way. In the field of production, there are significant differences between the two groups in the process of regeneration, the process of regeneration, and the process of Ca. The CaB yeast was used to detect the fat, and the essence was used to get the target. Once the CaB is reduced (in the presence of 2mMEDTA), in the presence of Ca (in the presence of 2mMCaCl), in the presence of Ca (in the presence of 2mMCaCl), and in the presence of acidified chemicals, this is the only way to reduce the cost of reduction, the presence of Ca (in the presence of 2mMCaCl). In the presence of Ca, the speed of regeneration, the speed of regeneration, and the combination of Ca and Ca, there is a rapid growth rate. On the one hand, the rate of CaB infection was significantly higher than that of the control group. On the other hand, the rate was significantly higher than that of the control group. On the other hand, the rate of the disease was detected by the CaB, the yeast, the yeast, the bacteria, the sex, the Ser, the Ser at the N-terminal and the Ser at the N end. CaB Ser^ & lt;-1> is highly dependent on Ca (in the presence of 2mMEDTA in the presence of 2mMCa), peudo wild type (in the presence of peudo), and in the presence of large and low levels. In the presence of 100mM, Ca, CaB Ser^ & lt;-1>, the regeneration rate, the wild type of peudo, the temperature of the wild type, the temperature of the partner, the rate of regeneration, and so on. The temperature range, 100 μ m CaB series & lt;-1> temperature, the regeneration rate of Ca, the temperature of Ca, the temperature of curve, the temperature of midpoint, the temperature of 35mM, and the temperature of temperature were measured. At the beginning of the regeneration period, the initial stage of the regeneration process is caused by the formation of the initial stage of the regeneration. in the early stage of the regeneration, the initial stage of the regeneration is caused by the formation of the initial stage of the regeneration. in the early stage of the regeneration, the initial stage of the regeneration is caused by the initial phase of the regeneration. in the early stage of the regeneration, the initial stage of the regeneration is caused in the field (in the field).