両生類の性腺分化を支配する遺伝子の解析

两栖动物性腺分化的基因分析

• 批准号: 07283216
• 负责人: 中村 正久
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07283216/
• 关键词: 両生類; 遺伝子; 性腺

本研究は、両生類の性腺分化に係る遺伝子を人為的に発現させ、それらの遺伝子を解析することによって哺乳類をふくめた脊椎動物の性腺分化のしくみを明らかにすることを目的としている。研究材料のツチガエルはテストステロンによって雌から雄に性が転換することから、当初、ステロイドホルモンの合成及び代謝酵素が性腺分化に関与していると考え、3β-ヒドロキシデヒドロゲナーゼ及び5α-レダクターゼの遺伝子の単離を試みた。二つの酵素のcDNA(ヒト、ラット、ニジマス等)をプロープとして、スクリーニングを行ったところ、いくつかの陽性クローンを得たので、塩基配列を決定し、ホモロジー検索を行ったが、目的とする遺伝子ではなかった。以前、我々は、小胞体Ca^<2+>結合蛋白、カルレキィキュリン(CLT)が精子形成に重要な役割を果たしている可能性を示した[Exp.Cell Res.205(1993)101].そこで、この蛋白が両生類の性腺分化に重要な働きをしているのではないかと考え、その役割を明らかにするため、まず、CLTcDNAクローンを得て塩基配列を決定した。同時に、CLTと類似アミノ酸配列をもつ小胞体Ca^<2+>結合蛋白、カルネクシン(CLX)cDNAクローンの塩基配列も決定した。CLXcDNAの塩基配列の決定は哺乳類以外の動物では、我々の報告が最初である。カエルの組織において、CLXとCLT遺伝子は、その発現に著しい違いがあり、前者が成体の肝臓だけ発現するのに対し、後者は全ての組織で発現する。しかし、時期と量が著しく異なる。未分化性腺において、CLT遺伝子は発生の初期から発現するが、量的には少ない。ところが、変態後の卵巣はCLT遺伝子を異常と思われるほど強く発現する。これとは逆に、同期の精巣におけるCLT遺伝子の発現は弱い。テストステロンを投与した場合、未分化性腺では、CLT遺伝子の発現が著しく抑制される。CLX遺伝子は性腺ではほとんど発現しないので、テストステロンの影響はない。CLT蛋白をカエルの肝臓から精製し、マウスに免疫して抗体を作成した後、カエルの性腺(特に卵巣)で免疫染色を行ったところ、卵細胞の成長にともない多量のCLT蛋白が出現し、特異的な分布パターンを示した。以上の結果からCLT蛋白が両生類(カエル)の性腺分化のみならず卵形成においても重要な役割を果していると思われた。

は, struck this study class の gonadal differentiation る に department but 伝 を man-made に 発 now さ せ, そ れ ら の posthumous son 伝 を parsing す る こ と に よ っ て mammals を ふ く め た vertebrate の gonad differentiated の し く み を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て い る. Research materials の ツ チ ガ エ ル は テ ス ト ス テ ロ ン に よ っ て female か ら male sexual が に planning in す る こ と か ら, original, ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン の synthesis and metabolic enzyme が び gonad differentiated に masato and し て い る と え test, 3 beta ヒ ド ロ キ シ デ ヒ ド ロ ゲ ナ ー ゼ and び 5 alpha レ ダ ク タ ー ゼ の heritage 伝 son の 単 from を try み た. Two つ の enzyme の cDNA (ヒ ト, ラ ッ ト, ニ ジ マ ス etc) を プ ロ ー プ と し て, ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た と こ ろ, い く つ か の positive ク ロ ー ン を must た の で, salt base with を decided し, ホ モ ロ ジ ー 検 cable line を っ た が, purpose と す る heritage 伝 son で は な か っ た. Before, I 々 は, small Cell body Ca ^ 2 + > < binding protein, カ ル レ キ ィ キ ュ リ ン (cli) が spermatogenesis に important な "を cut fruit た し て い る possibility を shown し た [Exp. Cell Res. 205 (1993) 101] そ こ で, こ の protein が struck raw class の gonad differentiated に important な 働 き を し て い る の で は な い か と え test, そ の "を cut Ming ら か に す る た め, ま ず, CLTcDNA ク ロ ー ン を have て salt base with column を decided し た. に, cli と similar ア ミ ノ acid with column を も つ small cell body Ca ^ 2 + > < binding protein, カ ル ネ ク シ ン (CLX) cDNA ク ロ ー ン の salt base with column も decided し た. CLXcDNA immunosaline binding <s:1> determines で で in <s:1> animals other than 々 mammals, and I 々 <s:1> report が initially である. カ エ ル の organization に お い て, CLX と cli heritage 伝 は, そ の 発 に now the し い い spare が あ り is crucial, the former が adult の liver だ け 発 now す る の に し polices, the latter は て の organization で 発 now す る. <s:1> なる なる, period と quantity が authored by く difference なる. Undifferentiated gonads にお て て, CLT progeny 伝 occur, in the early stage of <s:1> ら occur するが, and the amount of に is reduced な な. Youdaoplaceholder0 ろが ろが, after the transformation, the <s:1> CLT remains of the <s:1> egg nests を を abnormal と thoughts われるほ く strongly く occur する. <s:1> れと れと reverse に, and the 伝 offspring of the におけるCLT of the concurrent <s:1> spermatous nest showed <s:1> weak <e:1>. Youdaoplaceholder0, を, when administered to <s:1> た, undifferentiated gonads で, and CLT progeny 伝, が inhibitory effects of く and される occur. The 伝 offspring of the 伝 gonads of CLX, で で ほとん ほとん <e:1>, develop <s:1> な <s:1> で で and テストステロ <e:1> <s:1>, which affect な な な. Cli protein を カ エ ル の is crucial liver か ら refined し, マ ウ ス に immune し て antibody を made し た, カ エ ル の gonad (巣 に eggs) で immune dyeing line を っ た と こ ろ, egg の growth に と も な い の abundant cli が し, specific protein な distribution パ タ ー ン を shown し た. の above results か ら cli protein が struck raw class (カ エ ル) の gonad differentiated の み な ら ず egg form に お い て も important な "を cut fruit し て い る と think わ れ た.

项目成果

S. Yamamoto, Y. Kondo, H. Hanada, M. Nakamura: "Strong expression of the calreticulin gene in the liver of Rana rugosa tadpoles but not adult frogs" Journal of Experimental Zoology. (in press). (1996)

S. Yamamoto、Y. Kondo、H. Hanada、M. Nakamura：“钙网蛋白基因在林蛙蝌蚪肝脏中强表达，但在成年青蛙中没有”《实验动物学杂志》。