含过渡金属转录调控因子基因表达调控机制研究-猫眼课题宝

含过渡金属转录调控因子基因表达调控机制研究

批准号：

08249215

负责人：

青野重利

金额：

$1.47万

依托单位：

Japan Advanced Institute of Science and Technology

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

财政年份：

1996

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1996 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08249215/

关键词：

転写調節因子プロトヘムセンサー蛋白質シグナル伝達鉄・硫黄クラスター

项目摘要

项目成果

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英文摘要

最近、新規な転写調節因子として、分子中に遷移金属イオンを含む転写調節因子の存在が報告され始めた。本研究では、そのような遷移金属含有型転写調節因子のうち、大腸菌由来のSoxRタンパク、および光合成細菌由来のCooAタンパクを対象とし、これらの転写調節因子の機能発現において、その分子中の金属イオンが果たす役割、金属サイトの構造等を明らかにすることを目的として研究を行なった。大腸菌JM109株のクロモソームDNAを鋳型としたPCRによりSoxR遺伝子を単離し、これをtacプロモーターを有するpKK223-3にクローニングすることにより、SoxR発現ベクターを調製した。本発現ベクターを用い、大腸菌中でSoxRを発現させることに成功した。発現したSoxRを精製し、その電子吸収スペクトルを測定したところ、[2Fe-2S]クラスターに特徴的なシグナルを示した。また、電子スピン共鳴スペクトルにおいても[2Fe-2S]クラスターの存在を確認することができた。SoxR中には、鉄硫黄クラスターの配位子として機能すると考えられるシステインが4個所、存在する。これらのシステムが、実際に鉄硫黄クラスターの配位子となっているかどうかを確かめるため、部位特異的変異導入により、これら4個所のシステインをセリンに置換した変異型タンパクを調整した。その結果、これら4種の変異型SoxRは,すべて分子中に鉄硫黄クラスターを含まない、アポ型として発現することがわかった。このことから、分子中に存在する4個のシステインは、すべて鉄硫黄クラスターの配位子として機能していると考えられる。CooAについても同様に、大腸菌における発現系の構築を行ない、その発現に成功した。精製したCooAは、ヘムタンパクに特徴的な電子吸収スペクトルを示した。

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会议论文

Shigetoshi Aono: "A novel heme protein that acts as a carbon monoxide-dependent transcriptional activator in Rhodospirillum rubram" Biochem.Biophys.Res.Commun.228・(3). 752-756 (1996)

Shigetoshi Aono：“一种在红螺菌中充当一氧化碳依赖性转录激活剂的新型血红素蛋白”Biochem.Biophys.Res.Commun.228·(3) (1996)。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

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