遷移金属含有型転写調節因子による遺伝子発現調節機構に関する研究

含过渡金属转录调控因子基因表达调控机制研究

• 批准号: 10129209
• 负责人: 青野 重利
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Japan Advanced Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10129209/
• 关键词: 転写調節因子; ヘム蛋白質; DNA結合蛋白質; 一酸化炭素

CooA中のヘムは、酸化型、還元型、CO結合型、いずれの状態においても、6配位構造を取っている。還元型CooAとCOを反応させた場合、還元型CooA中のヘムは配位飽和な状態にあるにも関わらず、容易にCOと反応し、CO結合型CooAが生成する。すなわち、COが還元型CooA中のヘムに配位する場合には、二つある軸配位子の内の一方がCOと置換されることにより、CO結合型CooAが生成することになる。COがヘムに配位する際に、軸配位子の解離が起こることにより、ヘム近傍のコンフォメーションが変化することが、^1H-NMRの測定により明かとなった。CO配位に伴う軸配位子の解離により誘起されるヘム近傍のコンフォメーション変化が、最終的にはCooA分子全体のコンフォメーション変化をもたらすことにより、CooAが活性化されるものと考えられる。CooA中に含まれるヘムの軸配位を決定するため、配位性のアミノ酸をアラニン等の非配位性アミノ酸に置換した、変異型CooAを調製し、それらの電子吸収スペクトルを測定した。His、Cys、Metについては、CooA中に存在する、すべての残基について変異を導入した。その他の配位性アミノ酸については、CooAのヘム結合ドメイン(N末端から131残基目までの領域)中に存在するものについて、変異を導入した。変異導入の結果、Cys75およびAsp72に変異を導入した場合、酸化型において電子吸収スペクトルに変化が観測された。His77に変異を導入した場合には、還元型における電子吸収スペクトルに変化が観測された。酸化型において、Cys75がヘムに軸配位していることは、EPR等の測定により確認された。しかし、Asp72については、Asp72がヘムの配位子となっているのか、あるいは、変異導入の二次的影響により電子吸収スペクトルが変化したのか、現時点では確定できていない。

In CooA, there are three types: acidification type, reduction type, CO binding type, いずれのstate においても, and 6 coordination structure っている. In the case of reduced CooA and CO, the coordination saturation state of the reduced CooA is reduced, and it is easy to react with CO and CO, and the CO-binding CooA is generated.すなわち, CO が reduction type CooA medium のヘムに coordination する occasion には, 二つあるaxial coordination のInner side COA replacement COA and CO binding type CooA generation COO. CO が ヘ ム に coordination す る 间 に, axial coordination position の dissociation が rise こ る こ と に よ り, ヘ ム close proximity の コンフォメーションが変化することが, ^1H-NMRのdetermination により明かとなった. CO Coordination and Axis Coordination Dissociation and the Final Coordination Coordination The whole A molecule is activated and activated, and CooA is activated. CooA contains non-coordinating materials such as the axial coordination determination system and the coordination system. It can be used for the measurement of chemical acid substitution, modified CooA modulation, and electron absorption measurement. His, Cys, Met, etc., exist in CooA, and the residues of すべての are imported.そのhis coordinating acid については, CooA のヘム binding ドメイン (N-terminal There is a するものについて in the から131 residue field) and a different した is introduced. The result of the introduction of the divergence, Cys75 およびAsp72 に変different を introduction した case, acidification type においてelectron absorption スペクトルに変化が観measurement された. His77 has a different type of introduction, a reduced type of electron absorption, and a reduced type of electron absorption. Acidification type test, Cys75 test, axis coordination test, EPR, etc. are used for measurement and confirmation.しかし、Asp72については、Asp72がヘムのmatching seat となっているのか、あるいは、変The secondary influence of heterogeneous introduction is the absorption of electrons, the transformation of electrons, and the determination of the current point.

项目成果

S.Aono: "Solution structure of an artificial Fe_8S_8 ferredoxin:the D13C variant of Bacillus schlegelii Fe_7S_8 ferredoxin" Eur.J.Biochem.,. 258(2). 502-514 (1998)

S.Aono：“人工 Fe_8S_8 铁氧还蛋白的溶液结构：Bacillus schlegelii Fe_7S_8 铁氧还蛋白的 D13C 变体”Eur.J.Biochem.,。

S.Aono: "Redox-controlled ligand exchange of the heme in the CO-sensing transcriptional activator CooA" J.Biol.Chem.,. 273(40). 25757-25764 (1998)

S.Aono：“CO 感应转录激活剂 CooA 中血红素的氧化还原控制配体交换”J.Biol.Chem.,。

S.Aono: "Site-directed mutagenesis of cysteine to serine in a superoxide responsive transcriptional regulator SoxR" J.Mol.Catal., B:Enzymatic. 4(5/6). 283-287 (1998)

S.Aono：“超氧化物响应转录调节因子 SoxR 中半胱氨酸向丝氨酸的定点诱变”J.Mol.Catal.，B：酶学。

T.Uchida: "Heme environmental structure of CooA is modulated by the target DNA binding:Evidences from resonance Raman spectroscopy and CO rebinding kinetics" J.Biol.Chem.,. 273(32). 19988-19992 (1998)

T.Uchida：“CooA 的血红素环境结构受目标 DNA 结合的调节：来自共振拉曼光谱和 CO 再结合动力学的证据”J.Biol.Chem.,。

S.Aono: "Solution Structure of the Oxidized Fe_7S_8 Ferredoxin from the Thermophilic Bacterium Bacillus schlegelii by ^1HNMR Spectroscopy" Biochemistry. 37(27). 9812-9826 (1998)

S.Aono：“通过 ^1HNMR 光谱测定嗜热细菌 Bacillus schlegelii 的氧化 Fe_7S_8 铁氧还蛋白的溶液结构”生物化学。