アンモニア酸化反応に関与する新規な金属酵素中の活性点構造とその性質

一种参与氨氧化反应的新型金属酶的活性位点结构及其性质

• 批准号: 05750700
• 负责人: 青野 重利
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05750700/
• 关键词: 硝化細菌; アンモニアモノオキシゲナーゼ; ヒドロキシアミン酸化酵素

本研究ではまず、アンモニアモノオキシゲナーゼ、ヒドロキシアミン酸化酵素等の硝化反応酵素系を含む従属栄養細菌Arthrobacter globiformisの最適培養条件の検討を行った。その結果、本細菌は以下に示すような組成の培地において良好な生育を示した。培地組成(g/1,000mlH20):KH_2PO_4(8.2g),NaOH(1.6g),MgSO_47H_2O(0.5g),KCl(0.5g),CaCl_2(0.5mg),CuCl_2(0.5mg),FeCl_36H_2O(0.5mg),ZnCl_2(0.5mg),(NH_4)_2SO_4(4g),CH_3COONa(10g),コハク酸ナトリウム(5g)菌体の培養は、容量500mlのバッフル付き三角フラスコに上記の培地100mlを入れ、30度で激しく攪拌しながら行った。培養開始24時間後に遠心分離により菌体を集め、l0mMリン酸緩衝液に懸濁した。まず最初に、この菌体懸濁液を用い菌体レベルでの酵素活性の測定を行った。フェリシアン化カリウムを電子受容体として用い、ヒドロキシアミン酸化活性を測定したところ、この菌体懸濁液は活性を示さなかった。さらに本菌体懸濁液を超音波処理してえられた無細胞抽出液を用いて同様の実験を行ったが、やはり活性は見られなかった。このように活性が観測されなかったのは、フェリシアン化カリウムが電子受容体として機能していないためか、あるいは本培養条件においては、目的とする酵素が誘導されていないためであると考えられる。

This study is based on the results of this study. Nitrification and reaction enzymes such as enzymes contain the genus Arthrobacter The optimum culture conditions for globiformis are determined. As a result, this bacterium has good fertility and good fertility. Peidi composition (g/1,000mlH20): KH_2PO_4 (8.2g), NaOH (1.6g), MgSO_47H_2O (0.5g), KCl (0.5g), CaCl_2 (0.5mg), CuCl_2 (0.5mg), FeCl_36H_2O (0.5mg) ,ZnCl_2(0.5mg),(NH_4)_2SO_4(4g),CH_3COONa(10g),コハク acid ナトリウム(5g) )Bacterial cell culture, 500ml capacity, 500ml triangle culture, 100ml sterilization, 30 degree stirring, 30 degree stirring, 100ml, 100ml, 100ml. Twenty-four hours after the start of culture, the bacterial cells were centrifugally separated and suspended in 10mM rumanic acid buffer. The initial activity of the bacterial cell suspension and bacterial cell suspension was measured using the enzyme activity of the bacterial cells.フェリシアン化カリウムをelectron acceptor is used for い, ヒドロキシアミンThe acidification activity is determined by the test method, and the activity test of the bacterial cell suspension is measured by the test method. The bacterial cell suspension and ultrasonic treatment of the cell-free extract are used.このようにActivity testされなかったのは、フェリシアン化カリウムがelectron acceptor としてfunctional function していないためか, あるいは This culture condition においては, the purpose of とするenzyme が induction されていないためであるとtest えられる.

项目成果

S.Aono: "Characterization and thermostability of a membrane-bound hydrogenase from a thermophilic hydrogen oxidizing bacterium,Bacillus schlegelii" Biosci.Biotech.Biochem.57. 1177-1179 (1993)

S.Aono：“来自嗜热氢氧化细菌，Bacillus schlegelii 的膜结合氢化酶的表征和热稳定性”Biosci.Biotech.Biochem.57。