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DNA認識能を有する蛋白質超分子機能の金属イオンによる制御機構に関する研究

DNA認識能を有する蛋白質超分子機能の金属イオンによる制御機構に関する研究
金属离子对具有DNA识别能力的超分子蛋白功能调控机制研究
批准号：
07229217
负责人：
青野 重利
金额：
$1.34万
依托单位：
Japan Advanced Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1995 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07229217/
关键词：
転写調節因子非ヘム鉄DNA結合蛋白質

项目摘要

项目成果

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本研究では、大腸菌中に含まれる転写調節因子SoxR蛋白質の活性点を構成している金属サイトの構造と機能を明らかにするため、以下に述べるような研究を行った。まず、組換え型SoxR蛋白質発現系の構築を行った。発現ベクターには、tacプロモーターを有する原核細胞発現用ベクターであるpKK223‐3を用いた。pKK223‐3に組み込むsoxR遺伝子は、大腸菌JM109株のクロモソームDNAを鋳型とするPCR法により合成した。組換え型SoxR蛋白質発現用の宿主には、大腸菌JM109株を用いた。組換え型SoxR蛋白質発現は、以下のようにして行った。発現ベクターを有する大腸菌JM109株を、30度で培養し、培養液の600nmにおける吸光度が0.4に達した時点で、イソプロピル‐β‐D‐チオガラクトピラノシド(IPTG)を添加する。IPTG添加後、培養温度を20度とし、一晩培養を続ける。組換え型SoxR蛋白質の精製は、以下のようにして行った。培養終了後の菌体を集め、リン酸緩衝溶液に懸濁する。超音波処理により菌体を破壊し、遠心分離により可溶性画分を得る。これを、陽イオン交換カラムであるCM‐Sepharoseに添加し、吸着蛋白質を溶出させる。組換え型SoxR蛋白質は、赤茶色の画分として溶出してくる。このようにして得られた組換え型SoxR蛋白質は、ほぼ均一な状態であることを、SDS‐PAGEにより確認した。精製した組換え型SoxR蛋白質の吸収スペクトルを測定したところ、2核の鉄硫黄クラスターに特徴的な吸収ピークが観測された。このことから、SoxR蛋白質には、植物型フェレドキシンと類似した、2核の鉄硫黄クラスターが含まれていることが分かった。
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会议论文
S.Aono: "The effect of negative charge of heme propionate on plotoinduced electron transfer between zinc myoglobin and methylviologen" Inorg. Chim. Acta. 233. 127-129 (1995)
S.Aono：“丙酸血红素负电荷对锌肌红蛋白和甲基紫精之间的绘图诱导电子转移的影响”Inorg。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
S.Aono: "Thermostability and electron transfer activity of the ferredoxin from a themophilic hydrogen oxidizing bacterium, Bacillus schlegelii" J. Mol. Catal.95. 173-178 (1995)
S.Aono：“来自嗜热氧化细菌（Bacillus schlegelii）的铁氧还蛋白的热稳定性和电子转移活性”J. Mol。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
S.Aono: "Photoreduction of cytochrome c with zinc protoporphyrin reconstituted myoglobin(ZnPP-Mb)" J.Mol.Catal.95. 193-196 (1995)
S.Aono：“用锌原卟啉重构肌红蛋白（ZnPP-Mb）对细胞色素 c 进行光还原”J.Mol.Catal.95。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
S.Aono: "The effect of chemical modification of zinc myoglobin on the photoinduced electron transfer with methylviologen" J.Mol.Catal.96. 87-92 (1995)
S.Aono：“锌肌红蛋白的化学修饰对甲基紫精光诱导电子转移的影响”J.Mol.Catal.96。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
ガス分子により駆動される新規なセンサータンパク質の機能発現機構
ガスセンサー蛋白質の時間分解紫外共鳴ラマン分光
タンパク質配位空間を利用した気体分子センシングとシグナル伝達
タンパク質配位空間を利用した気体分子センシングとシグナル伝達
海外基金