胆管側膜上有機アニオン輸送担体のクローニングとチャンネル機能の構造

胆管膜有机阴离子转运蛋白的克隆及通道功能结构

• 批准号: 08268214
• 负责人: 杉山 雄一
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08268214/
• 关键词: 有機アニオン輸送担体; Dubin-Johnson症候群; EHBR; 変異機構; cMOAT; 一次性能動輸送; cDNAクローニング; 胆汁排泄

ラット胆管側膜上に存在する、有機アニオン輸送性一次性能動輸送担体(canalicular multispecific organic anion transporter;cMOAT)のcDNAクローニングを行った。クローニングの戦略としては、cMOATの基質特異性が、multidrug resistance associated protein(MRP)と類似していることに着目し、MRPのABC領域との相同性に着目する方法をとった。その結果、4623bpよりなる新規cDNA配列が得られた。この配列をプローブとしてNorthen blotを行ったところ、正常ラット肝臓polyA+RNAとのhybridizeは観察されたものの、cMOAT機能を欠損する変異ラットEisai hyperbilirubinemic rat(EHBR)においてはその発現は検出されなかった。更に、HEBRにおける変異機構について検討を加えたところ、855番目のアミノ酸をコードする遺伝子に一塩基置換が生じ、その結果としてopen reading frame中にstop codonが挿入されていることが示された。さらにcMOAT cDNAを哺乳類発現ベクターにsubcloningし、その機能をNIH3T3細胞を基にしたtransfected cellを用いることにより測定したところ、cMOAT機能が観察された。これらの結果は、単離されたcDNAがcMOATをコードすることを示している。

The cDNA library of canalicular multispecific organic anion transporter (cMOAT) exists on the lateral membrane of bile duct. The matrix specificity of cMOAT, multidrug resistance associated protein (MRP) and similarity of MRP to ABC domain are discussed. The new cDNA alignment of 4623 bp was obtained. The sequence of these genes is called the Northern blot, and the normal sequence of genes is called the hybridization of polyA + RNA. In addition, HEBR has a variety of different mechanisms to check whether there is an increase in the number of copies, 855 of which are available in the open reading frame. cMOAT cDNA is found in mammals, subcloning, and function is detected in NIH 3T3 cells. The results of this study were as follows: cDNA for cMOAT was extracted from the cDNA library.

项目成果

K.Ito: "Molecular cloning of canalicular multispecific organic anion transporter defective in Eisai hyperbilirubinemic rats." Am.J.Physiol.272. G16-G22 (1997)

K.Ito：“卫材高胆红素血症大鼠中存在缺陷的小管多特异性有机阴离子转运蛋白的分子克隆。”

M.Yamazaki: "Recent advances in carrier-mediated hepatic uptake and biliary excretion of xenobiotics." Pharm.Res.13. 497-513 (1996)

M.Yamazaki：“载体介导的异生物质的肝脏摄取和胆汁排泄的最新进展。”

H.Shimamura: "Biliary excretion of glycyrrhizin in rats:Kinetic basis for the muluplicity in the bile canalicular transport of organic anions." Pharm.Res.13. 1833-1839 (1996)

H.Shimamura：“大鼠甘草甜素的胆汁排泄：有机阴离子胆小管转运多重性的动力学基础。”

O.Takenaka: "Carrier-mediated active transport of the glucuronide and sulfate of 6-hydroxy-5,7-dinothy 1-2-methylamino-4-(3-pyridylmethyl)benzothiazolle(E3040)into rat liver:Quantitative comparison of permeability in isolated hepatocytes,perfused liver an

O.Takenaka：“载体介导的 6-羟基-5,7-二甲氨基-4-(3-吡啶甲基)苯并噻唑 (E3040) 的葡萄糖醛酸和硫酸盐主动转运至大鼠肝脏中：渗透性的定量比较

K.Ito: "Expression of a putative ATP-binding cassette region,homologons tothat in multidrug resistame associated protein(MRP),is hereditarilydefective in Eisai hyperbilirubinemic rats(EHBR)." Int.Hepatol.Commun.4. 242-299 (1996)

K.Ito：“假定的 ATP 结合盒区域的表达与多药耐药相关蛋白 (MRP) 中的同源，在卫材高胆红素血症大鼠 (EHBR) 中存在遗传性缺陷。”