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アンチセンスDNAの至適投与法の確立を目指した体内動態、細胞内動態解析法の開発

开发生物动力学和细胞内动力学分析方法，旨在建立反义 DNA 的最佳施用方法

基本信息

批准号：
09877455
负责人：
杉山雄一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度に引き続き、アンチセンスの体内動態ならびに薬効の評価系確立を目的とした検討を行った。デリバリーする際の有効な標的部位となるレセプター介在性エンドサイトーシスに関する速度論解析を行い、問題点の一つであるダウンレギュレーションのin vivo評価系の確立を試みた。肝細胞増殖因子受容体として知られるc-metのダウンレギュレーションを過剰量リガンドで引き起こしたところ臓器非特異的にc-metの低下と回復が観察された。臓器細胞膜分画を調製しWestern blot法により細胞表面レセプターの定量化を行ったところ、得られた発現量とリガンドの臓器クリアランスとの間に比例関係があり、本手法によりin vivoレベルでのダウンレギュレーションの解析が可能であることが示唆された。これまで我々が試みてきたエンドサイトーシス速度論モデル構築において、本手法を用いることによりレセプター側の動きについても情報を得ることが可能となった。そこでアンチセンスの薬効評価系として申請者らが精通している薬物輸送蛋白質(トランスポーター)の機能発現をターゲットとした。すなわち肝細胞血管側に発現するトランスポーターに対するアンチセンスを構築し、蛋白の発現量と機能について検討を行った。アフリカツメガエル卵母細胞発現系で肝臓総mRNAに対するハイブリダイゼーションを行いアンチセンスの本質的活性を確認した。また肝トランスポーターの基質を数種類選択し、これらの肝細胞取り込みに占めるトランスポーターNtcpならびにoatp-1の寄与率を算出した。これによりin vivoでアンチセンスをターゲティングした際の、機能(肝細胞への基質の取り込み)の最大活性を見積ることが可能となり、薬効発現系の確立につながるものとなった。

In the past year, we have established a system of evaluation of the internal dynamics of the disease. The analysis of velocity theory and the establishment of evaluation system in vivo are carried out according to the relationship between the target position and the medium condition. Hepatocyte growth factor receptor is known to cause c-met to decrease in response to liver disease. The quantitative analysis of cell surface protein by Western blot analysis is possible because of the proportional relationship between protein expression and protein expression. This method can be used to obtain information about the speed of the vehicle. The applicant shall be proficient in the functional development of the drug delivery protein. The vascular side of liver cells is developed in a variety of ways, such as protein construction, protein production and protein function. To confirm the essential activity of oocyte development system in response to liver mRNA The number of matrix species selected from the liver matrix was calculated. The maximum activity of liver cells (matrix) can be seen in vivo, and the development system can be established in vivo.