CskファミリーHylチロシンキナーゼによる細胞分裂異常の分子機構

Csk家族Hyl酪氨酸激酶引起细胞异常分裂的分子机制

基本信息

批准号：
08265250
负责人：
山口直人
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Src型キナーゼの活性は、増殖因子などの刺激後G_0からG_1期および細胞分裂M期において、それぞれ一過性の活性上昇が見られ、Src型キナーゼの活性はCskによって常に抑制的に調節されている。我々は、Cskと高い相同性をもつHylを単離し、ゲノム構造の解析からCskとファミリーを形成することを明らかにしてきた。また最近、HylはC__-skh__-omologous k__-inase(Chk)へと名称が変更された。本研究では、ヒト血液系細胞を用いて、Chkが細胞増殖に与える作用を検討し、ChkとCskとの同時発現があることを考慮しながら、Src型キナーゼ活性制御機構を調べることを目的とした。1.Chkチロシンキナーゼは、Src型キナーゼ制御作用をもつCskと構造上類似する。我々が作製した単クローン抗体を用いたin vitroキナーゼアッセイの結果、ChkはCskと同様に、Src型キナーゼのC末端チロシン残基をリン酸化し、Src型キナーゼのチロシンリン酸化活性を抑制することがわかった。2.血液細胞と脳ではChkとCsk両者の発現がある。血小板において、ChkとCskの細胞内局在が異なり、ChkはCD36に会合しているLynの活性を局在変化により制御することが分かり、Translocation-controlled negative regulationと名付けた。ChkとCskのSrc型キナーゼへの機能分担を示すことができた。3.ヒト未熟骨髄系KMT-2細胞株にChk過剰発現した細胞は、増殖の遅延・多核化などが見られ、M期染色体分配異常が観察された。Chkの細胞内局在を調べたところ、ChkのみならずCskおよびSrc型キナーゼLynとc-Yesは核内にも存在していた。しかも、M期染色体にそれらは会合していた。Src型キナーゼとその制御機構が染色体の動態変化に関わっている可能性を示すことができた。

观察到SRC型激酶的活性在刺激生长因子后的G_0至G_1相和细胞分裂M期会瞬时增加，并且SRC型激酶的活性通过CSK不断地抑制。我们有孤立的HYL，它与CSK具有很高的同源性，并揭示了它由基因组结构分析的CSK组成。最近，Hyl已更名为C __- SKH __-杂质K __-inase（CHK）。在这项研究中，我们研究了CHK使用人体血液系统细胞对细胞增殖的影响，并旨在研究CHK和CSK的共表达，以研究SRC型激酶活性的机理。 1。CHK酪氨酸激酶在结构上与CSK相似，CSK具有SRC型激酶控制特性。使用我们创建的单克隆抗体的体外激酶测定，我们发现CHK（例如CSK）磷酸化SRC型激酶的C-末端酪氨酸残基，并抑制SRC型激酶的酪氨酸磷酸化活性。 2。CHK和CSK均在血细胞和大脑中表达。在血小板中，CHK和CSK的亚细胞定位有所不同，发现CHK通过定位变化来调节与CD36相关的LYN的活性，并被命名为易位控制的阴性调节。我们能够证明CHK和CSK的分裂为SRC型激酶。 3。在人不成熟的髓样KMT-2细胞系中过表达CHK的细胞显示出延迟的增殖和多核，并且观察到异常的M期染色体分布。当我们研究CHK的亚细胞定位时，我们发现不仅CHK，而且CSK和SRC型激酶Lyn和C-YE都存在于核中。此外，它们与M期染色体有关。可以证明SRC型激酶及其调节机制可能与染色体动态变化有关。