血液幹細胞特異抗原、tieとCD34を介するシグナル伝達機構

造血干细胞特异性抗原、Tie和CD34介导的信号转导机制

• 批准号: 05670919
• 负责人: 山口 直人
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670919/
• 关键词: 血液幹細胞; tie; CD34; シグナル伝達

血液幹細胞表面に発現する抗原蛋白の構造から、細胞質ドメインにチロシンリン酸化酵素を持つものとチロシンリン酸化酵素の構造は持たないが細胞質ドメインはセリン残基がリン酸化されるものとがあることが明かにされてきた。本研究では、それら特異的抗原のうちで、後者のタイプであり細胞接着を介したシグナル伝達に関与することが推測されているCD34分子と、前者のタイプの受容体型チロシンリン酸化酵素であるc-tie分子それぞれの造血における役割を明らかにする目的で実験を行った。まず、CD34分子が細胞接着を介して造血に関与するのかを調べた。CD34に対する単クローン抗体4A1を作製し、ストローマ細胞とCD34陽性細胞との共培養系に4A1抗体を添加すると造血抑制が起こった。さらに、幹細胞系細胞株よりCD34分子を精製して骨髄単核細胞の培養系に添加すると、コロニー形成が抑制された。従って、造血の場において、CD34分子はストローマ細胞と血液幹細胞との相互作用に関係していることが明かとなった。次に、相互作用する分子の検索のために、CD34分子の細胞外領域とIgG1定常部位とのキメラ遺伝子を作製し、キメラ遺伝子安定導入細胞を作製した。培養上清からキメラ蛋白を精製し結合試験を行ったところ、キメラ蛋白に特異的に結合するストローマ細胞蛋白質を見いだした。現在、その分子の同定を急ぐとともにCD34を介するシグナル伝達に関わるかどうか検討している。c-tieに関しては、リガンドを明らかにするためにc-tieの細胞外領域とIgG1定常部位とのキメラ遺伝子を作製した。今後FACSなどを用いて、リガンドとの結合を検討する予定である。以上、CD34及びc-tie分子に対するリガンドが明らかとなれば、リガンド結合によりそれぞれの細胞質内ドメインにphysical associationする蛋白質を同定できシグナル伝達経路が判明するので、幹細胞のシグナル伝達経路の解明にはリガンドの同定が最も重要なポイントとなろう。

Blood stem cell surface に 発 now す る の antigen protein structure か ら, cytoplasmic ド メ イ ン に チ ロ シ ン リ ン acidification enzyme を hold つ も の と チ ロ シ ン リ ン の acidification enzyme structure は hold た な い が cytoplasm ド メ イ ン は セ リ ン residues が リ ン acidification さ れ る も の と が あ る こ と が Ming か に さ れ て き た. This study で は, そ れ ら specific antigen の う ち で, the latter の タ イ プ で あ り cells then を interface し た シ グ ナ ル 伝 da に masato and す る こ と が speculation さ れ て い る CD34 molecular と, the former の タ イ プ の by capacity size チ ロ シ ン リ ン acidification enzyme で あ る c - tie molecules そ れ ぞ れ の hematopoietic に お け る "を cut Ming ら か に す で る purpose be From を to った. The まず and CD34 molecules が cells then を interact with <s:1> て hematopoiesis に and する <s:1> を を を を べた べた. CD34 に す seaborne る 単 ク ロ ー ン し, the antibody 4 a1 を cropping ス ト ロ ー と マ cell CD34 positive cells と の co-culture system に 4 a1 antibody を add す る と hematopoietic inhibitory が こ っ た. さ ら に, stem cell lines よ り CD34 molecular を refined し て bone marrow nuclear cells 単 の training department に add す る と, コ ロ ニ ー form が inhibit さ れ た. 従 っ て, hematopoietic の に お い て, CD34 molecular は ス ト ロ ー マ と blood stem cell と の interaction に masato is し て い る こ と が Ming か と な っ た. に, interaction す る molecular の 検 cable の た め に, CD34 molecular の extracellular domain と IgG1 constant parts と の キ メ ラ heritage を son 伝 し, キ メ ラ heritage 伝 son settle import cell を cropping し た. Culture supernatant か ら キ メ ラ protein を refined し combination test line を っ た と こ ろ, キ メ ラ に specific protein に combining す る ス ト ロ ー マ cell proteins を see い だ し た. Now, そ の の molecules with fixed を urgent ぐ と と も に CD34 を interface す る シ グ ナ ル 伝 da に masato わ る か ど う か beg し 検 て い る. C - tie に masato し て は, リ ガ ン ド を Ming ら か に す る た め に c - tie の extracellular domain と IgG1 constant parts と の キ メ ラ heritage 伝 system を son し た. In the future, FACSな を を will use the combination of な て, リガ <e:1> ドと and を検 to discuss する and determine である. Above, CD34 and び c - tie molecules に す seaborne る リ ガ ン ド が Ming ら か と な れ ば, リ ガ ン ド combining に よ り そ れ ぞ れ の cytoplasm ド メ イ ン に physical Association す を る proteins might be で き シ グ ナ ル 伝 da 経 road が.at す る の で, stem cells の シ グ ナ ル 伝 da 経 road の interpret に は リ ガ ン ド の with fixed が も most important な ポ イ ン ト と な ろ う.

项目成果

Gunji Y: "Human primitive hemopoietic progenitor cells are more enriched in KIT^<low> cells than KIT^<high> cells." Blood. 82. 3283-3289 (1993)

Gunji Y：“人类原始造血祖细胞中 KIT^<low> 细胞比 KIT^<high> 细胞更丰富。”

Iwama A: "Molecular cloning characterization of mouse TIE and TEK receptor tyrosine kinase genes and their expression in hematopoietic stem cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 301-309 (1993)

Iwama A：“小鼠 TIE 和 TEK 受体酪氨酸激酶基因的分子克隆特征及其在造血干细胞中的表达。”