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血液幹細胞の巨核球への増殖分化に関わる新規非受容体型チロシンキナーゼの研究

新型非受体酪氨酸激酶参与血液干细胞增殖分化为巨核细胞的研究

基本信息

批准号：
07671216
负责人：
山口直人
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671216/
关键词：
チロシンリン酸化酵素 Hyl Src型キナーゼ Csk 多核化巨核球

项目摘要

巨核球への増殖・分化の機構を明らかにするために、血液幹細胞の巨核球化の際に発現が上昇する非受容体型チロシンリン酸化酵素Hylの機能解析をおこなった。1.我々が単離したHylチロシンキナーゼは、Src型チロシンキナーゼの抑制的制御作用を持つCskと構造上きわめて類似しているが、血液細胞と脳でのみHylとCskの両者の発現があり、他の細胞種では、Cskの発現しか認められない。単クローン性抗体を作製してHylの細胞内局在を調べたところ、血小板では主に膜画分に、COS細胞を用いた一過性発現では核内にも局在し、細胞質内に主に存在しているCskと機能的差異が予想された。2.Hylの機能を調べるために、ヒト血液細胞株KMT-2にHylを恒常的過剰発現させた。得られた全てのクローンは染色体数の増加と多核化を起こし、分裂期での染色体整列・分配の異常および細胞質分裂抑制と多核化細胞の3次元的分裂を示した。3.Hyl過剰発現細胞において、Src型キナーゼのうち、Lynに選択的な自己リン酸化の抑制が認められ、自己リン酸化抑制はLynの酵素活性を上昇させた。Hyl過剰発現により、複数の蛋白のチロシンリン酸化の亢進が起こり、特に、分裂期特異的に出現するチロシンリン酸化蛋白p65を見い出した。このp65が細胞質分裂抑制に重要な働きをしていることが考えられる。4.Hyl遺伝子欠損マウスを作製した。生まれてきたマウスの外見は一応正常であり、成熟細胞のエフェクター機能についての詳細な検討が必要である。Hylはin vitroでは、Cskと同様に、Src型キナーゼのC末端チロシンをリン酸化するが、本研究で示したように、in vivoで、細胞内局在およびSrc型キナーゼ制御機構の相違・Hyl過剰発現による表現形から、HylとCskの役割分担を予想させる。今後、Hylの基質およびp65の同定などを行い、多核化機構を明らかにしてゆく予定である。

The megakaryocytic colonization and differentiation mechanism showed that the megakaryocytic spheroidization assay and the megakaryocytic spheroidization assay showed that the acidified enzyme Hyl could be used to analyze the enzyme acidification enzyme in the non-receptive type. 1. We are responsible for the control of the inhibition of Hyl and SRC-type antigens. If you use the Csk device to create a template that is similar to that of the Csk, and the blood cells will detect the infection, other cell types will be detected, and the Csk will show that the virus will not be affected. The Hyl antibodies were detected in the cytosol, the cytosolic membrane of the thrombocytopenia was analyzed, and the COS cells were used to detect the presence of intracellular antibodies in the nucleus and the presence of the host in the cytosol. The difference of the Csk mechanism was expected. The 2.Hyl machine was able to detect the constant infection of KMT-2 cells and blood cell lines of KMT-2 cells. The results showed that the chromosome number of polynucleated cells was increased and the division of the third order of polynucleated cells was inhibited by the whole row distribution of chromosomes during mitosis. The results of 3.Hyl filter showed that the activity of Lyn enzyme was inhibited by self-acidification, which was selected by SRC, Lyn and SRC, and the enzyme activity was inhibited by self-acidification. The presence of Hyl, complex protein, and acidification of protein, especially in mitotic phase and mitotic phase, increased the presence of acid protein p65. The cell division inhibition of p65 cells is important. The 4.Hyl child does not have enough money to make a mistake. If you are in a normal situation, if you have a mature cell, you will be able to find out if it is necessary to do so. Hyl, in vitro, Csk, SRC, C-terminal, C-terminal, acid, in vivo, in vivo, Hyl, Hyl, SRC, SRC, SRC From now on, the Hyl system will make sure that the p65 agreement is the same as that of the designated bank and the multi-nuclear organization.