血液幹細胞の巨核球への増殖分化に関わる新規非受容体型チロシンキナーゼの研究

新型非受体酪氨酸激酶参与血液干细胞增殖分化为巨核细胞的研究

• 批准号: 07671216
• 负责人: 山口 直人
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671216/
• 关键词: チロシンリン酸化酵素; Hyl; Src型キナーゼ; Csk; 多核化; 巨核球

巨核球への増殖・分化の機構を明らかにするために、血液幹細胞の巨核球化の際に発現が上昇する非受容体型チロシンリン酸化酵素Hylの機能解析をおこなった。1.我々が単離したHylチロシンキナーゼは、Src型チロシンキナーゼの抑制的制御作用を持つCskと構造上きわめて類似しているが、血液細胞と脳でのみHylとCskの両者の発現があり、他の細胞種では、Cskの発現しか認められない。単クローン性抗体を作製してHylの細胞内局在を調べたところ、血小板では主に膜画分に、COS細胞を用いた一過性発現では核内にも局在し、細胞質内に主に存在しているCskと機能的差異が予想された。2.Hylの機能を調べるために、ヒト血液細胞株KMT-2にHylを恒常的過剰発現させた。得られた全てのクローンは染色体数の増加と多核化を起こし、分裂期での染色体整列・分配の異常および細胞質分裂抑制と多核化細胞の3次元的分裂を示した。3.Hyl過剰発現細胞において、Src型キナーゼのうち、Lynに選択的な自己リン酸化の抑制が認められ、自己リン酸化抑制はLynの酵素活性を上昇させた。Hyl過剰発現により、複数の蛋白のチロシンリン酸化の亢進が起こり、特に、分裂期特異的に出現するチロシンリン酸化蛋白p65を見い出した。このp65が細胞質分裂抑制に重要な働きをしていることが考えられる。4.Hyl遺伝子欠損マウスを作製した。生まれてきたマウスの外見は一応正常であり、成熟細胞のエフェクター機能についての詳細な検討が必要である。Hylはin vitroでは、Cskと同様に、Src型キナーゼのC末端チロシンをリン酸化するが、本研究で示したように、in vivoで、細胞内局在およびSrc型キナーゼ制御機構の相違・Hyl過剰発現による表現形から、HylとCskの役割分担を予想させる。今後、Hylの基質およびp65の同定などを行い、多核化機構を明らかにしてゆく予定である。

Giant nuclear ball へ の raised colonization, differentiation の institutions を Ming ら か に す る た め に, blood stem cells の megakaryocytes, spheroidizing の interstate に 発 now rising が す る than by capacity size チ ロ シ ン リ ン acidification enzyme Hyl の function analytical を お こ な っ た. I 々 が 単 from し た Hyl チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ は, Src チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ の inhibitory effect of the system of imperial を hold つ Csk と structure on き わ め て similar し て い る が, blood cell と 脳 で の み Hyl と Csk の struck is の 発 now が あ り, he の cells で は, Csk の 発 now し か recognize め ら れ な い. 単 ク ロ ー ン antibodies を cropping し て Hyl の cells inside bureau in を adjustable べ た と こ ろ, platelet で は main draw points に に membrane, COS cell を い た transient 発 now で は intranuclear に も bureau exist in the cytoplasm に し, Lord に し て い る Csk と functional differences が to think さ れ た. 2.Hyl gland function を regulates べるために, ヒト blood cell line MTT-2 にHylを constantly overoccurs させた. Have ら れ た full て の ク ロ ー ン は chromosome Numbers is の raised many nucleation を と こ し, divide で の chromosome abnormal distribution of the whole column, の お よ び cytoplasmic division inhibit と の 3 yuan more nuclear cell divides を shown し た. 3. Hyl through turning 発 now cells に お い て, Src キ ナ ー ゼ の う ち, Lyn に sentaku な their リ ン acidification の inhibit が recognize め ら れ, リ ン acidizing inhibition は Lyn の enzyme activity を rise さ せ た. Hyl before turning 発 now に よ り, plural の protein の チ ロ シ ン リ ン acidification の hyperthyroidism が up こ り, に, divide specific に す る チ ロ シ ン リ ン acidic protein p65 を see い out し た. <s:1> p65が cytoplasmic division inhibition に important な な を を て て る る とが とが えられる えられる えられる えられる 4.Hyl left 伝 seeds that were damaged and ウスを were used to make た. Raw ま れ て き た マ ウ ス の see は outside a normal で 応 あ り, mature cells の エ フ ェ ク タ ー function に つ い て の detailed な beg が 検 necessary で あ る. Hyl は in vitro で は, Csk と with others に, Src キ ナ ー ゼ の C terminal チ ロ シ ン を リ ン acidification す る が, this study で し た よ う に, in In vivo で, intracellular bureau お よ び type Src キ ナ ー ゼ system royal institution の digitization, Hyl through turning 発 now に よ る performance form か ら, Hyl と Csk cut share を の service to think さ せ る. In the future, the Hyl <s:1> matrix およびp65 <e:1> will be jointly determined as な を を to carry out な, and the multi-nuclear organization を, ら, に, てゆく will be determined as である.

项目成果

Yamaguchi N: "Golgi retention mechanism of β-1,4-galactosyltransferase : membrane-spanning domain-dependent homodimerization and association with α- and β-tubulins." J.Biol.Chem.270. 12170-12176 (1995)

Yamaguchi N：“β-1,4-半乳糖基转移酶的高尔基体保留机制：跨膜域依赖性同二聚化以及与 α-和 β-微管蛋白的关联。J.Biol.Chem.270（1995）。

Iwama A: "Terminal differentiation of murine resident peritoneal macrophages is characterized by expression of the STK protein tyrosine kinase,a receptor for MSP." Blood. 86. 3394-3403 (1995)

Iwama A：“小鼠腹腔巨噬细胞的终末分化特征是 STK 蛋白酪氨酸激酶（MSP 的受体）的表达。”

Hashiyama M: "Predominant expression of a receptor tyrosinekinase,TIE,in hematopoietic stem cells and B cells." Blood. 87. 93-101 (1996)

Hashiyama M：“受体酪氨酸激酶 TIE 在造血干细胞和 B 细胞中的主要表达。”