ブロメラインインヒビターの3次元構造解析とそれに基づく阻害剤の開発

菠萝蛋白酶抑制剂的三维结构分析及基于其的抑制剂开发

• 批准号: 10163205
• 负责人: 田之倉 優
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10163205/
• 关键词: ブロメライン インヒビター; システインプロテアーゼ; インヒビター; 蛋白質工学; 遺伝子クローニング; 発現系

プロメライン インヒビター(BI)は、パイナップルの茎に存在する蛋白質性のシステインプロテアーゼ インヒビターである。我々はBIを単離精製し、アイソタイプVI(BI-VI)の2次元NMRスペクトルを測定解析して、溶液3次元構造を決定した。その結果、この蛋白質はβシートにより形成されるドメイン2個からなり、各ドメインは3本鎖の逆平行βシートからなることがわかった。BIのトリプシンならびにキモトリプシンに対する阻害活性を測定したところ、このインヒビターはセリンプロテアーゼ阻害活性も有することが明らかとなった。本研究では、BI-VIをタンパク質工学的に種々修飾あるいは置換して有用なインヒビターを開発することを目的として、遺伝子のクローニングと発現系の構築とを行った。BI-VIのアミノ酸配列をもとに、BIの遺伝子をクローニングした。genomic DNAから全長がクローニングされたBI遺伝子は、重鎖、軽鎖、重鎖、軽鎖というように重鎖、軽鎖の配列が3回繰り返され、軽鎖と重鎖の間には5残基の、重鎖と軽鎖の間には19残基のアミノ酸が挿入されていることが判明した。また、この遺伝子構造からアミノペプチダーゼとカルボキシペプチダーゼの作用を考慮することにより、これまでに蛋白質として得られているすべてのBI異性体のアミノ酸配列が説明できた。この挿入配列は一般的なイントロン則には当てはまらないので、イントロンではなくBI遺伝子の1部であり、プロ配列だと考えられる。このBI遺伝子の構造に基づいて、BI-VIおよび全長BIの発現系を構築し、活性を確認した。今後、上記の目的の変異体BIの作成を目指す。

The protein content of the protein is determined by the content of the protein. I want to refine BI and determine the 3D structure of solution by 2D NMR. As a result, the protein is formed into two parts, each part is locked into three parts, and the opposite part is formed into three parts. BI's high voltage resistance activity is determined by the high voltage resistance activity. In this study, BI-VI was used to modify the quality of the product and to construct the development system. BI-VI's amino acid sequence is very important, BI's amino acid sequence is very important. Genomic DNA sequence length is divided into four groups: BI gene, double lock, double lock The structure of this protein is considered to be the role of the protein in the formation of the heterostructure of BI. The first part of this article is about the general layout of the company. The structural basis of BI gene, BI-VI gene and full-length BI gene development system were constructed and identified. In the future, note the purpose of different BI preparation instructions.

项目成果

Hatano,K.: "The amino acid sequences of isoforms of bromelain inhibitor from pineapple stem." J.Biochem.124(2). 457-461 (1998)

Hatano,K.：“菠萝茎中菠萝蛋白酶抑制剂亚型的氨基酸序列。”