卵成熟における減数分裂再開の分子機構

卵母细胞成熟过程中减数分裂恢复的分子机制

基本信息

批准号：
08275202
负责人：
山下正兼
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08275202/
关键词：
卵成熟魚類両生類 mRNA MPF cdc2 サイクリンB 単クローン抗体

项目摘要

卵成熟における減数分裂再開の分子機構を明らかにすることを目的に、以下の2点について調べた。1)キンギョサイクリンBmRNAの翻訳開始機構ポリA鎖の伸長を阻害するコルジセピンが、ホルモン刺激によるキンギョ卵成熟を阻害することを発見した。このことはポリA鎖伸長がサイクリンBmRNAの翻訳開始に関わることを示唆する。ポリA鎖伸長の調節機構を探るため、キンギョのcytoplasmic polyadenylation element binding protein (CPEB)、ポリAポリメラーゼ、ポリA結合蛋白質のcDNAクローニングを行い、大腸菌で作製したそれぞれのリコンビナント蛋白質に対する単クローン抗体を作製した。現在、これら抗体を用いた解析を進めている。2)アカガエル卵成熟過程における卵成熟促進因子(MPF)の形成.活性化機構アカガエルサイクリンB1とB2の全長cDNAをクローニングし、リコンビナント蛋白質に対する抗体を作製し、サイクリンB1、B2蛋白質の卵成熟過程での変化を追った。両者ともに未成熟卵には存在せず、卵成熟過程で出現し、cdc2と結合してMPFになることが示され、pre-MPFの不在が確認された。バナデ-トがアカガエルMPFの活性化を阻害することからcdc25の関与が示唆されていたが、バナデ-ト存在下でcdc2のチロシンリン酸化は認められず、スレオニンリン酸化が阻害された。すなわち、バナデ-トによるMPFの活性化阻害はcdc25を介したものではなく、cdk7/サイクリンHを介したものと推定された。以上のことから、アカガエル卵成熟におけるMPFの形成.活性化機構はキンギョのそれとほぼ同様と結論される。

研究了以下两个点，目的是阐明在卵成熟过程中恢复减数分裂的分子机制。 1）我们发现虫虫抑制了海洋细胞周期蛋白BMRNA的Polya链启动机制的扩展，它抑制了由于激素刺激而导致的海洋成熟。这表明Polya链扩展参与了细胞周期蛋白B mRNA的翻译。为了探索多拉链扩展的机制，对沼泽细胞质多腺苷的结合蛋白（CPEB），Polya聚合酶和Polya结合蛋白的cDNA克隆进行了，并进行了单克隆抗体，以针对在大肠杆菌中产生的各自的重组蛋白制备单克隆抗体。当前，正在进行使用这些抗体的分析。 2）在红蛙鸡蛋成熟过程中形成卵成熟启动子（MPF）。激活机制：将红色青蛙Cyclin B1和B2的全长cDNA克隆起来，以产生针对重组蛋白的抗体，并遵循Cyclin B1和B2蛋白在卵成熟过程中的变化。两者都不出现在未成熟的卵中，而是在卵成熟过程中出现，与CDC2结合并成为MPF，证实没有前MPF。尽管钒酸盐抑制了红蛙MPF的激活，但建议在钒酸盐存在下未观察到Cdc25的参与，未观察到Cdc2的酪氨酸磷酸化，并且抑制了苏氨酸磷酸化。也就是说，据估计，钒酸盐对MPF激活的抑制不是通过CDC25介导的，而是通过CDK7/Cyclin H介导的。从上面可以得出的结论是，在红蛙鸡蛋的成熟过程中，MPF形成和激活的机制几乎与金鱼相同。