卵成熟における減数分裂再開の分子機構

卵母细胞成熟过程中减数分裂恢复的分子机制

• 批准号: 07283202
• 负责人: 山下 正兼
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07283202/
• 关键词: 卵成熟; 減数分裂; 魚類; 両生類; mRNA; MPF; cdc2; サイクリンB

1.卵成熟促進因子(MPE)の形成・活性化機構キンギョ卵成熟誘起に重要な意味を持つサイクリンBの翻訳開始機構を探るため、キンギョ卵成熟過程におけるサイクリンBmRNAのポリA鎖の変化を調べた。ポリA鎖は卵核胞崩壊後に伸長することが示され、これはサイクリンBmRNAの翻訳開始より、安定化に関わることが示唆された。サイクリンBmRNAの翻訳開始に関わると予想されるサイクリンB特異的翻訳阻害因子を同定するため、サイクリンBmRNAに結合する蛋白質の検索を行った。その結果、3種のタンパク質が検出され、これらタンパク質をコードするcDNAのクローニングを計画している。アカガエル卵成熟過程におけるMPFの形成・活性化機構を調べるため、アカガエルサイクリンB1、B2のcDNA(全長の約2/3)をRT/PCRで得、その産物に対する抗体を作製した。これを用い、卵成熟過程におけるサイクリンB1、B2の挙動を調べ、キンギョと同様、アカガエル未成熟卵にはcdc2・サイクリンB複合体はなく、ホルモン刺激後に形成されることがわかった。しかし、キンギョと異なり、ツメガエルと同様、その活性化にはcdc25が必要であることが示された。これらのことは、アカガエルはキンギョとツメガエルの中間的なMPF形成・活性化機構を採用していることを示す。2.MPFの作用、特に卵成熟に果たす役割大腸菌で作製されたキンギョサイクリンBタンパク質をゼブラィシュ未成熟卵に注射すると、卵核胞崩壊が起こったが、染色体凝縮は見られなかった。このことは、cdc2・サイクリンB複合体は卵核胞崩壊には関与するが、染色体凝縮には関与しないことを示唆する。

1. Eggs mature, promoting factor (MPE) の form activeness, institutions キ ン ギ ョ eggs mature induced に important な mean を hold つ サ イ ク リ ン B の 訳 start institutions を agent る た め, キ ン ギ ョ egg maturation に お け る サ イ ク リ ン BmRNA の ポ リ A lock の variations change を adjustable べ た. ポ リ A lock は egg nucleus cell に elongation after fracture 壊 す る こ と が shown さ れ, こ れ は サ イ ク リ ン BmRNA の 訳 start よ り, stabilization に masato わ る こ と が in stopping さ れ た. サ イ ク リ ン BmRNA の 訳 start に masato わ る と to think さ れ る サ イ ク リ ン specific turn 訳 resistance against factor B を with fixed す る た め, サ イ ク リ ン BmRNA に combining す る protein の 検 cable line を っ た. そ の results, three の タ ン パ ク qualitative が 検 out さ れ, こ れ ら タ ン パ ク qualitative を コ ー ド す る cDNA の ク ロ ー ニ ン グ を project し て い る. ア カ ガ エ ル egg maturation に お け る MPF の formation, activeness institutions を adjustable べ る た め, ア カ ガ エ ル サ イ ク リ ン B1, B2 の cDNA length (about 2/3) の を RT/PCR で, そ の product に す seaborne る antibody を cropping し た. こ れ を い, egg maturation に お け る サ イ ク リ ン B1, B2 の 挙 motion を べ, キ ン ギ ョ と with others, ア カ ガ エ ル immature eggs に は cdc2, サ イ ク リ ン B complex は な く, ホ ル モ ン stimulus に formed after さ れ る こ と が わ か っ た. し か し, キ ン ギ ョ と different な り, ツ メ ガ エ ル と with others, そ の activeness に は cdc25 が necessary で あ る こ と が shown さ れ た. こ れ ら の こ と は, ア カ ガ エ ル は キ ン ギ ョ と ツ メ ガ エ ル の middle な MPF formation, activeness institutions を using し て い る こ と を す. 2. MPF の role, に eggs mature fruit に た cut coliform で す "cropping さ れ た キ ン ギ ョ サ イ ク リ ン B タ ン パ ク qualitative を ゼ ブ ラ ィ シ ュ immature eggs に injection す る と, egg nucleus cell collapse 壊 が up こ っ た が, chromosome condensation は see ら れ な か っ た. こ の こ と は, cdc2 サ イ ク リ ン B complex は egg nucleus cell collapse 壊 に は masato and す る が, chromosome condensation に は masato and し な い こ と を in stopping す る.

项目成果

Katsu,Yoshinao他5名: "Molecular cloning and immunological analysis of goldfish cyclin A during oocyte maturation." Developmental Biology. 170. 616-625 (1995)

Katsu、Yoshinao 和其他 5 人：“卵母细胞成熟过程中金鱼细胞周期蛋白 A 的分子克隆和免疫学分析。” 170. 616-625 (1995)

Yoshida, Noriyuki 他2名: "Changes in phosphorylation activities during goldfish and Xenopus oocyte maturation." Zoological Science. 12. 599-606 (1995)

Yoshida、Noriyuki 和其他 2 人：“金鱼和爪蟾卵母细胞成熟过程中磷酸化活性的变化。动物学科学”12. 599-606 (1995)。

Tokumoto, Toshinobu 他4名: "Purification of latent proteasome(20S proteasome)and demonstration of active proteasome in goldfish(Carassius auratus)oocyte cytosol." Biomedical Research. 16. 173-186 (1995)

Tokumoto、Toshinobu 和其他 4 人：“金鱼（鲫鱼）卵母细胞胞质中潜在蛋白酶体（20S 蛋白酶体）的纯化和活性蛋白酶体的演示。生物医学研究 16. 173-186 (1995)”

Tokumoto, Toshinobu 他4名: "Purification and characterization of active proteasome(26S proteasome)from goldfish ovaries." Biomedical Research. 16. 207-218 (1995)

Tokumoto、Toshinobu 和其他 4 人：“金鱼卵巢中活性蛋白酶体（26S 蛋白酶体）的纯化和表征。生物医学研究”16. 207-218 (1995)。

Naito, Kunihiko 他7名: "Association of p34^<cdc2> and cyclin B1 during meiotic maturation in porcine oocytes." Developmental Biology. 168. 627-634 (1995)

Naito、Kunihiko 和其他 7 人：“猪卵母细胞减数分裂成熟过程中 p34^<cdc2> 和细胞周期蛋白 B1 的关联。发育生物学”168. 627-634 (1995)