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動物卵成熟における卵成熟促進因子の形成・活性化機構

动物卵母细胞成熟过程中卵母细胞成熟促进因子的形成及激活机制

基本信息

批准号：
08680784
负责人：
山下正兼
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680784/
关键词：
cdc2 サイクリンB MPF 魚類両生類卵成熟減数分裂リン酸化

项目摘要

動物卵成熟における卵成熟促進因子(MPF)の形成・活性化機構を明らかにすることを目的に、以下の2点について調べた。1)キンギョサイクリンの合成開始機構mRNAの翻訳開始によるキンギョサイクリンの合成機構を探るため、ビオチン標識RNAアフィニティー精製法で得た、キンギョサイクリンBmRNA結合蛋白質のアミノ酸配列の決定を試みた。しかし、N末の化学的修飾と思われる理由のため、配列は決定できなかった。今後、これら蛋白質を蛋白質分解酵素で限定分解し、得られたペプチド断片のアミノ酸配列を決定する予定である。2)アカガエルにおけるMPF形成・活性化機構新規に作成したアカガエルサイクリンB1とB2に対する抗体とすでに作製済みのcdc2に対する抗体を用い、アカガエル卵成熟過程におけるcdc2、サイクリンB1、B2蛋白質の挙動を調べた。サイクリンB1、B2ともに末成熟卵には存在せず、卵核胞崩壊前に出現した。出現したサイクリンB1、B2は末成熟卵ですでに存在するcdc2と結合してMPFを形成した。cdc2とサイクリンBの複合体形成と同時に、cdc2は35kDから34kDに変化し、それと同時にMPF活性も上昇した。34kD cdc2のスレオニンに^<32>Pリン酸の取り込みが見られたことから、この分子量変化はスレオニンリン酸によるものと推測された。また、34kD cdc2は新規に作成した161番目のスレオニン(T161)がリン酸化されたcdc2を認識する抗体で認識された。以上のことから、アカガエル卵成熟においては、キンギョと同様、サイクリンBの合成、cdc2との複合体形成、T161リン酸化を経て、MPFは形成、活性化されると考えられる。

The formation and activation mechanism of egg maturation promoting factor (MPF) in animal eggs are described in the following two aspects: 1) The synthesis mechanism of mRNA is detected by the method of purification, and the acid alignment of mRNA binding protein is determined. The end of the chemical modification is the reason for the decision. In the future, the protein decomposition enzyme will be limited to determine the sequence of protein fragments. 2) The new regulation of MPF formation and activation mechanism was established to regulate the activity of B1 and B2 proteins during egg maturation. B1, B2 and B3 are the most mature eggs in the world. Cdc2 and MPF are formed when mature eggs B1 and B2 are present. cdc2 and cdc3 are formed simultaneously, cdc2 changes from 35kD to 34kD, and MPF activity increases simultaneously. 34kD cdc2 is the best choice for molecular weight change<32>. 34kD cdc2 is a new antibody recognition system. The above-mentioned changes in protein content, protein content, protein B synthesis, cdc2 complex formation, T161 protein acidification, MPF reverse formation, activation, etc.