動物卵成熟における卵成熟促進因子の形成・活性化機構

動物卵成熟における卵成熟促進因子(MPF)の形成・活性化機構を明らかにすることを目的に、以下の2点について調べた。1)キンギョサイクリンの合成開始機構mRNAの翻訳開始によるキンギョサイクリンの合成機構を探るため、ビオチン標識RNAアフィニティー精製法で得た、キンギョサイクリンBmRNA結合蛋白質のアミノ酸配列の決定を試みた。しかし、N末の化学的修飾と思われる理由のため、配列は決定できなかった。今後、これら蛋白質を蛋白質分解酵素で限定分解し、得られたペプチド断片のアミノ酸配列を決定する予定である。2)アカガエルにおけるMPF形成・活性化機構新規に作成したアカガエルサイクリンB1とB2に対する抗体とすでに作製済みのcdc2に対する抗体を用い、アカガエル卵成熟過程におけるcdc2、サイクリンB1、B2蛋白質の挙動を調べた。サイクリンB1、B2ともに末成熟卵には存在せず、卵核胞崩壊前に出現した。出現したサイクリンB1、B2は末成熟卵ですでに存在するcdc2と結合してMPFを形成した。cdc2とサイクリンBの複合体形成と同時に、cdc2は35kDから34kDに変化し、それと同時にMPF活性も上昇した。34kD cdc2のスレオニンに^<32>Pリン酸の取り込みが見られたことから、この分子量変化はスレオニンリン酸によるものと推測された。また、34kD cdc2は新規に作成した161番目のスレオニン(T161)がリン酸化されたcdc2を認識する抗体で認識された。以上のことから、アカガエル卵成熟においては、キンギョと同様、サイクリンBの合成、cdc2との複合体形成、T161リン酸化を経て、MPFは形成、活性化されると考えられる。

動物卵成熟における卵成熟促進因子(MPF)の形成・活性化機構を明らかにすることを目的に、以下の2点について調べた。1)キンギョサイクリンの合成開始機構mRNAの翻訳開始によるキンギョサイクリンの合成機構を探るため、ビオチン標識RNAアフィニティー精製法で得た、キンギョサイクリンBmRNA結合蛋白質のアミノ酸配列の決定を試みた。しかし、N末の化学的修飾と思われる理由のため、配列は決定できなかった。今後、これら蛋白質を蛋白質分解酵素で限定分解し、得られたペプチド断片のアミノ酸配列を決定する予定である。2)アカガエルにおけるMPF形成・活性化機構新規に作成したアカガエルサイクリンB1とB2に対する抗体とすでに作製済みのcdc2に対する抗体を用い、アカガエル卵成熟過程におけるcdc2、サイクリンB1、B2蛋白質の挙動を調べた。サイクリンB1、B2ともに末成熟卵には存在せず、卵核胞崩壊前に出現した。出現したサイクリンB1、B2は末成熟卵ですでに存在するcdc2と結合してMPFを形成した。cdc2とサイクリンBの複合体形成と同時に、cdc2は35kDから34kDに変化し、それと同時にMPF活性も上昇した。34kD cdc2のスレオニンに^<32>Pリン酸の取り込みが見られたことから、この分子量変化はスレオニンリン酸によるものと推測された。また、34kD cdc2は新規に作成した161番目のスレオニン(T161)がリン酸化されたcdc2を認識する抗体で認識された。以上のことから、アカガエル卵成熟においては、キンギョと同様、サイクリンBの合成、cdc2との複合体形成、T161リン酸化を経て、MPFは形成、活性化されると考えられる。