卵成熟における減数分裂再開の分子機構

卵母细胞成熟过程中减数分裂恢复的分子机制

• 批准号: 10160201
• 负责人: 山下 正兼
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10160201/
• 关键词: 卵成熟; 減数分裂; サイクリンB; 翻訳制御; Pumilio; mRNAマスキング; MPF

本研究は卵成熟における減数分裂再開の分子機構の解明を目的とし、以下の2点について調べた。1) サイクリンBmRNA翻訳開始機構卵成熟において減数分裂再開を誘起する最終因子である卵成熟促進因子(MPF)の形成・活性化には、その調節サブユニットであるサイクリンBmRNAのマスキングとその解除が関わる。ショウジョウバエや線虫でmRNAのマスキングに関与すると考えられているPumilioのキンギョとアフリカツメガエルホモログのcDNAクローニングを行い、単クローン抗体を作製した。得られた抗体を用いたウエスタンブロッティング解析により、アフリカツメガエル未成熟卵には150kDaのPumilio蛋白質が存在することが明らかにされ、本蛋白質の存在が脊椎動物において初めて確認された。さらに、ツメガエルサイクリンB1mRNAアフィニティークロマトグラフィーにより、Pumilio蛋白質はサイクリンBmRNAの3'非翻訳領域に特異的に結合する能力を有することが示され、この蛋白質がサイクリンBmRNA翻訳制御に関わる有力な候補であると判断された。2) サイクリンBサブタイプの卵成熟における機能分担アカガエル未成熟卵には不活性型MPF(pre-MPF)がないため、未だ不明のサイクリンBサブタイプの機能分担を探る絶好の実験系を提供する。これを利用して、サイクリンB1とB2の機能分担を解析した。成熟卵でのサイクリンB1及びB2蛋白質の局在を免疫組織化学法で調べた結果、サイクリンBlは卵細胞質全体に分布するのに対し、サイクリンB2は染色体及びその周辺に局在することがわかった。これらサブタイプの細胞内局在の違いは機能差を反映していると考えられる。現在、mRNAやアンチセンスRNAの注射によりどちらかのサブタイプのみを発現させた卵母細胞の詳細な解析を進めている。

This study aims to clarify the <s:1> molecular mechanism of <s:1> meiosis reopening during the maturation of <s:1> oocytes における and the を objective と べた. The following are two points: に て て て and べた. 1) サ イ ク リ ン BmRNA 訳 start institutions eggs mature に お い て meiosis to open を induced す る eventually factor で あ る eggs mature promoting factor (MPF) の formation, activeness に は, そ の adjust サ ブ ユ ニ ッ ト で あ る サ イ ク リ ン BmRNA の マ ス キ ン グ と そ の remove が masato わ る. シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ や nematodes で mRNA の マ ス キ ン グ に masato and す る と exam え ら れ て い る Pumilio の キ ン ギ ョ と ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル ホ モ ロ グ の cDNA ク ロ ー ニ ン グ を い, 単 ク ロ ー ン antibody を cropping し た. Have ら れ を た antibody with い た ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ parsing に よ り, ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル immature eggs に は 150 kda の protein Pumilio が exist す る こ と が Ming ら か に さ れ exist, this protein の が vertebrate に お い て early め て confirm さ れ た. さ ら に, ツ メ ガ エ ル サ イ ク リ ン B1mRNA ア フ ィ ニ テ ィ ー ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り, protein Pumilio は サ イ ク リ ン BmRNA の 3 'not turn に specific に 訳 field combining す る を power す る こ と が shown さ れ, こ の protein が サ イ ク リ ン BmRNA turn 訳 suppression に masato わ る な strong backup Youdaoplaceholder0 judge された. 2) サ イ ク リ ン B サ ブ タ イ プ の eggs mature に お け る functions share ア カ ガ エ ル immature eggs に は not active type MPF (pre - MPF) が な い た め unknown, not だ の サ イ ク リ ン B サ ブ タ イ プ の functions share を agent る great の be 験 す を provide る. <s:1> れを utilizes the functions of て て, サ サ リ リ リ B1とB2 <s:1> to share the を analysis of た た. Mature eggs で の サ イ ク リ ン B1 and び B2 protein の bureau in を immune histochemical methods で adjustable べ た results, サ イ ク リ ン Bl は egg mass all に distribution す る の に し, seaborne サ イ ク リ ン B2 は chromosomes and び そ の weeks 辺 に bureau in す る こ と が わ か っ た. The poor function of <s:1> in the local area of <s:1> within the cell を reflects the えられる て ると ると ると えられる test えられる. Now, mRNA や ア ン チ セ ン ス RNA の injection に よ り ど ち ら か の サ ブ タ イ プ の み を 発 now さ せ た oocytes の detailed analytical を な into め て い る.

项目成果

Yamamoto Satoshi: "The rise of intracellular Ca^<2+> level causes the decrease of cyclin B1 and Mos in the newt eggs at fertilization." Molecular Reproduction and Development. (印刷中). (1999)

Satoshi Yamamoto：“细胞内 Ca^<2+> 水平的升高导致受精时蝾螈卵中细胞周期蛋白 B1 和 Mos 的减少。”（出版中）。

Jibak Lee: "Tyrosine phosphorylation of p34^<cdc2> in metaphase II-arrested pig oocytes results in pronucleus formation without chromosome segregation." Molecular Reproduction and Development. 52. 107-116 (1998)

Jibak Lee：“中期 II 停滞的猪卵母细胞中 p34^<cdc2> 的酪氨酸磷酸化导致原核形成，而没有染色体分离。”

Masakane Yamashita: "Molecular mechanisms of meiotic maturation and arrest in fish and amphibian oocytes." Seminars in Cell and Developmental Biology. 9. 569-579 (1998)

Masakane Yamashita：“鱼类和两栖动物卵母细胞减数分裂成熟和停滞的分子机制。”

Ichirou Sakamoto: "Changes in cyclin B during oocyte maturation and early embryonic cell cycle in the newt,Cynops pyrrhogaster. Requirement of germinal vesicle for MPF activation." Developmental Biology. 195. 60-69 (1998)

Ichirou Sakamoto：“蝾螈卵母细胞成熟和早期胚胎细胞周期过程中细胞周期蛋白 B 的变化。MPF 激活需要生发囊泡。”

Quanqi Zhang: "Cytogenetic mechanisms for triploid and haploid egg formation in the triploid loach Misgurnus anguillicaudatus." Journal of Experimental Zoology. 281. 608-619 (1998)

张全琪：“三倍体泥鳅三倍体和单倍体卵形成的细胞遗传学机制。”