卵成熟におけるコード領域及び微小繊維依存性サイクリンB1翻訳制御の分子機構解析

卵母细胞成熟过程中编码区和原纤维依赖性细胞周期蛋白B1翻译控制的分子机制分析

• 批准号: 23370027
• 负责人: 山下 正兼
• 金额: $ 11.73万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23370027/
• 关键词: 翻訳制御; ゼブラフィッシュ; 微小繊維; 卵母細胞; サイクリンＢ１; 減数分裂; サイクリンB1

本研究では翻訳の部位と時期をリアルタイムで検出できるトランスジェニックゼブラフィッシュを用い、卵成熟過程におけるサイクリンB1 mRNAの部位及び時期特異的翻訳制御機構を解析した。1、部位及び時期特異的翻訳に関わる新規蛋白質の同定: サイクリンB1 mRNA凝集体に存在するIMP3、DDX6、ELAV-like 1、Zar1及び抗Pumilio抗体免疫共沈降に存在するHSP90βとPiwi-like 1のcDNAをクローニングし、サイクリンB1 mRNAとの結合をUVクロスリンク法で調べた。その結果、IMP3、ELAV-like 1、Zar1が結合することが判り、これらがサイクリンB1 mRNAの翻訳制御に関わる分子であることが示唆された。2、翻訳制御に関わるORFのシス配列とトランス因子の同定: 前年度の研究で、ORFの524から736番目の塩基中にmRNAの局在及び翻訳制御を担う配列が存在する事を示す結果が得られた。本年度はシス配列の同定を進め、9塩基からなる配列の同定に成功した。この配列に変異を持つレポーターmRNAは凝集体を形成して動物極に局在ず、ホルモン処理後の翻訳開始時期も早くなった。さらに、この配列が特定のタンパク質と相互作用して働く事が明らかになり、このシス配列を認識するトランス因子の同定への手がかりを得た。3、部位及び時期特異的翻訳制御における微小繊維の機能: 微小繊維に結合するモエシンタンパク質のC末端部とGFPの融合蛋白質を発現するトランスジェニックゼブラフィッシュの作出に成功した。これを用い、卵成熟過程における微小繊維の変化をリアルタイムで観察することにも成功した。この系は、微小繊維依存性のサイクリンB1 mRNA翻訳制御の詳細を明らかにするための強力な武器となり得ると期待される。

在这项研究中，可以实时检测位点和平移时间的转基因斑马鱼在卵成熟过程中分析细胞周期蛋白B1 mRNA的翻译控制机制的位点和时间。 1。鉴定参与现场特异性翻译的新型蛋白质：IMP3，DDX6，DDX6，Elav样1，ZAR1和抗粉状抗体抗体中存在于细胞周期蛋白B1 mRNA聚集体中的抗体抗体和piwi样抗体1，并通过UV CrossInging进行了Cyclin B1 mRNA的结合。结果表明，IMP3，类似Elav的1和ZAR1结合，表明这些是参与细胞周期蛋白B1 mRNA的翻译调节的分子。 2。鉴定参与翻译调节的ORF的顺式序列和反式因子：上一年的研究表明，在ORF的524至736中存在负责翻译调节的mRNA定位和序列。今年，我们开始确定顺式序列，并成功地识别了由九个碱基组成的序列。记者mRNA具有此序列突变形成聚集体的突变，并且不定位于动物杆，并且激素治疗后的翻译开始时间也增加了。此外，揭示了该序列与特定蛋白质相互作用，为识别识别该顺式序列的反式因子的识别提供了线索。 3。微纤维在特定于位点和时序特异性转移控制中的功能：我们成功地创建了一个转基因斑马鱼，该斑马鱼表达了Moesin蛋白的C末端部分，该部分与微纤维结合和GFP的融合蛋白结合。使用此过程，我们还成功地观察了卵成熟过程中超细纤维的变化。预计该系统将是揭示微纤维依赖性细胞周期蛋白B1 mRNA翻译控制的细节的强大武器。

项目成果

卵成熟過程でのゼブラフィッシュ cyclin B1 mRNA翻訳制御に関する新規シス配列の同定

鉴定参与卵母细胞成熟过程中斑马鱼细胞周期蛋白 B1 mRNA 翻译调节的新型顺式序列

• 发表时间: 2012
• 作者: Ota;R.;Kotani;T.;Masakane;Y.;Lars Hesselholt;Kyota Yasuda;Lars Hesselholt;Tomoya Kotani;Lars Hesselholt;安田 恭大
• 通讯作者: 安田 恭大

ニホンメダカ(Oryzias latipes)精原幹細胞マーカーの探索

寻找日本青鳉（Oryzias latipes）的精原干细胞标记物

• 发表时间: 2011
• 作者: Ota;R.;Kotani;T.;Masakane;Y.;Lars Hesselholt;Kyota Yasuda;Lars Hesselholt;Tomoya Kotani;Lars Hesselholt;安田 恭大;佐藤竜一
• 通讯作者: 佐藤竜一

Biochemical Characterization of Pumilio1 and Pumilio2 in Xenopus Oocytes

• DOI: 10.1074/jbc.m110.155523
• 发表时间: 2011-01-28
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Ota, Ryoma;Kotani, Tomoya;Yamashita, Masakane
• 通讯作者: Yamashita, Masakane

Possible Involvement of Nemo-like Kinase 1 in Xenopus Oocyte Maturation As a Kinase Responsible for Pumilio1, Pumilio2, and CPEB Phosphorylation

• DOI: 10.1021/bi2002696
• 发表时间: 2011-06-28
• 期刊: BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 2.9
• 作者: Ota, Ryoma;Kotani, Tomoya;Yamashita, Masakane
• 通讯作者: Yamashita, Masakane

Translational control of cyclin B1 mRNA by RNA granule formation in vertebrate oocytes

脊椎动物卵母细胞中 RNA 颗粒形成对细胞周期蛋白 B1 mRNA 的翻译控制

• 发表时间: 2012
• 作者: Ota;R.;Kotani;T.;Masakane;Y.;Lars Hesselholt;Kyota Yasuda;Lars Hesselholt;Tomoya Kotani
• 通讯作者: Tomoya Kotani