転写因子による染色体複製制御の解析

转录因子对染色体复制控制的分析

• 批准号: 08277214
• 负责人: 村上 洋太
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08277214/
• 关键词: 染色体複製; 転写因子

転写因子c‐Jun,PEBP2が染色体複製を活性化スる際どのような標的タンパク質と相互作用するのがポリオーマウイルス及び出芽酵母を用いて解析をおこない以下の結果を得た。1,転写因子c‐Jun,PEBP2の複製活性化ドメインと複製タンパク質の相互作用。BLAcoreを用いてc‐JunがポリオーマウイルスのT抗原と直接相互作用するが一本鎖結合タンパク質RP‐Aとは相互作用しないことを明らかにした。これはc‐JunがT抗原の複製開始点への結合を促進することに対応している。一方、PEBP2の複製活性化ドメインはT抗原、RP‐Aどちらとも相互作用せず未知の複製関連タンパク質を標的とすることが示唆された。2,出芽酵母ARSプラスミドの新しい複製活性の測定法の開発。出芽酵母のARSプラスミドを用いて転写因子の複製への効果を調べるに当たり、従来のプラスミドの安定性を用いて複製活性を測定する方法では必ずしも複製活性を直接反映しているとは限らないことや、プラスミド上の他のエレメント(セントロメア、選択マーカー遺伝子)の影響を顧慮する必要があることから、より直接的に複製活性を測定する方法を開発することを試みた。その結果ポリオーマウイルスの複製を測定する際に用いるDpnIアッセイを酵母に応用することでより直接ARSの活性を測定できるようになった。3,PEBP2の複製活性化ドメインの標的因子の検索PEBP2の複製活性化ドメインをbaitとするTwo Hybridアッセイを用いて、マウスP19細胞(ポリオーマウイルスの複製活性足底に使用した)由来のcDNAライブラリーをスクリーニングをおこないこない、標的タンパク質の候補を複数クローニングした。現在その解析をおこなっている。

C-Jun, PEBP2 are the target of chromosome replication. The following results are obtained. 1, the interaction between replication activation factors c-Jun, PEBP2 and replication factors. BLAST uses C‐Jun to bind directly to T ‐ antigen. The binding of c-Jun to T antigen replication initiation site is promoted. One side, PEBP2 replication activation, T-antigen, RP-A interaction, unknown replication association, T-antigen, RP-A interaction. 2. Development of a new method for determination of replicative activity of budding yeast ARS. The method for determining the replication activity of budding yeast is to directly reflect the replication activity of budding yeast by determining the stability of budding yeast and the replication effect of budding yeast. The method for determining replication activity is developed. DpnI is used to determine the activity of the yeast. 3. The cDNA sequence of PEBP2 replication-activated target gene was detected by bait-and-Two Hybrid gene expression system in P19 cells. Now the analysis is done.

项目成果

Kosei Ito: "c‐Jun stimulates origin‐dependent DNA unwinding by polyomavirus large Tantigen." EMBO J.15. 5636‐5646 (1996)

Kosei Ito：“c-Jun 通过多瘤病毒大 EMBO J.15 刺激起源依赖性 DNA 解旋。” (1996)