クロマチン構造および転写因子による染色体複製の制御機構の研究

染色质结构和转录因子控制染色体复制机制的研究

• 批准号: 12141202
• 负责人: 村上 洋太
• 金额: $ 34.56万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12141202/
• 关键词: 染色体複製; 複製起点; 転写因子; クロマチン高次構造; 生体分子; クロマチン; クロマチン構造; 核構造; 真核細胞; DNA複製; 複製ファクトリー; ポリオーマウイルス

1.転写因子の複製制御における役割の検討(村上)真核細胞において転写因子が複製を制御する分子機構はわかっていない。そこで、複製起点が詳細にわかっている出芽酵母を用いて、クロマチン免疫沈降法を用いて解析を行った結果、転写因子が複製のイニシエーターであるORCの複製起点への安定な結合を促すこと、さらにその促進がヒストンの高アセチル化を会していることを明らかにした。さらにショウジョウバエのChorion遺伝子の複製起点でも同様の現象が起こっている可能性が示唆されつつある。我々の結果は転写因子がその複製起点結合の特異性、言い換えれば複製起点の場所を決める因子として機能している可能性を示している。2.哺乳類細胞における複製起点の同定(宮武)competitive PCR法を用いた複製起点のマッピング法を確立し、IL-3/GM-CSFを産生しないヒト細胞株ではGM-CSF遺伝子下流領域に、産生細胞では、誘導的DNaseI感受性領域近傍に複製起点が検出された。このことは、転写特異的な遺伝子活性化特にアセチル化などによるクロマチン構造変換が複製活性を規定していることを示唆する。(2)前駆T細胞からTh2細胞に分化する過程でIL4/IL13領域の染色体構造が変化しこれらのサイトカインの産生が起こるがTh1細胞ではいずれもおこらない。精度を上げたマッピングより、Th1細胞でもすでにTh2細胞で見いだしていたのと同じIL13遺伝子下流のサイトカイン発現の制御領域とIL13遺伝子の間に複製起点が存在することがわかった。

1. The molecular mechanism of replication control of transcription factors in eukaryotes The origin of ORC replication and the stability of ORC replication were analyzed by using the immunoprecipitation method. The factors of ORC replication and the stability of ORC replication were analyzed by using the immunoprecipitation method. The origin of Chorion gene replication is the same phenomenon, and the possibility of this phenomenon is indicated. Our results show that the specificity of binding to the origin of replication, the function of the factor, and the possibility of binding to the origin of replication 2. The origin of replication in mammalian cells was established by competitive PCR, IL-3/GM-CSF production was detected in cell lines downstream of the GM-CSF gene, producing cells, and near the induced DNase I susceptibility domain. The activity of this gene is regulated by the structure of the gene. (2)During the differentiation of T cells from Th2 cells, the chromosome structure of IL4/IL13 domain changed, and the generation of Th1 cells began. The accuracy of the detection of IL-13 gene expression in Th1 cells and Th2 cells is higher than that in IL-13 cells.

项目成果

Ueno, M: "Fission yeast Arp6 is required for telomere silencing independently of Swi6"Nuc.Acid.Res.. 32. 736-741 (2004)

Ueno, M：“裂殖酵母 Arp6 是独立于 Swi6 的端粒沉默所必需的”Nuc.Acid.Res.. 32. 736-741 (2004)

Nakagawa, H. et al.: "Fission yeast CENP-B homologs nucleate centromeric heterochromatin by promoting heterochromatin specific histone tail modifications"Genes & Dev.. 16. 1766-1778 (2002)

Nakakawa, H. 等人：“裂殖酵母 CENP-B 同源物通过促进异染色质特异性组蛋白尾修饰使着丝粒异染色质成核”基因

Takemoto, M. et al.: "Cutting Edge : The differential involvement of the N-finger of GATA-3 in chromatin remodeling and transactivation during Th2 development"J.Immunol.. (in press). (2002)

Takemoto, M. 等人：“前沿：GATA-3 N 指在 Th2 发育过程中染色质重塑和反式激活中的差异参与”J.Immunol..（出版中）。

Takemoto, N.: "Cutting Edge : Chromatin remodeling at the IL-4/IL-13 intergenic regulatory region for Th2-specific cytokine gene cluster"J.Immunol.. 165. 6687-6691 (2000)

Takemoto，N.：“前沿：Th2 特异性细胞因子基因簇的 IL-4/IL-13 基因间调节区的染色质重塑”J.Immunol.. 165. 6687-6691 (2000)

Kaminuma, O. et al.: "Vab-induced activation of the human IFN-g gene promoter is mediated by upregulation of AP1 activity"FEBS lett.. 514. 153-158 (2002)

Kaminuma, O. 等人：“Vab 诱导的人 IFN-g 基因启动子激活是通过 AP1 活性上调介导的”FEBS lett.. 514. 153-158 (2002)