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複数の抗体酵素を用いての協同効果による標的タンパクの破壊に関する研究

多种抗体酶协同作用破坏靶蛋白的研究

基本信息

批准号：
13022261
负责人：
宇田泰三
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Hiroshima Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Helicobacter pylori菌の表面タンパク質として発現し、生体内尿素をアンモニアに変換することにより胃内で同菌の生存を支えている重要分子のウレアーゼを特異的に攻撃する抗体酵素を作製する事が本年度の研究実施計画の主要な点であったが、以下に示す事が明らかとなった。(1)抗Helicobader pylori urease体のうち、HpU系列ではこれまでに、HpU-1,2,9,10,17,18,19,20を、また、UA系列ではUA-1,7,9,15について解析を行った。その結果、HpU系列に関してはHpU-1,9,18,20に触媒三つ組み残基様構造の存在が推定された(UA系列は現在、立体構造を構築中)。(2)HpU-2および-18はHelicobader pylori菌のウレアーゼα-subunitのアミノ酸配列183-204および183-195をそれぞれ認識する。そこで抗体による抗原分解実験では、183-204に対応する配列SVELIDIGGNRRIFGFNALVDR(エピトープペプチド)を化学合成し、これを用いた。その結果、HpU-9軽鎖は急速にペプチド抗原を分解した。分解産物をMassで調べたところ、非常に多くのペプチド分解断片を確認した。(3)また、HpU-18軽鎖上記と同じ条件で混合したところ、約80時間の誘導期を経た後、やはりペプチド抗原の分解が始まり、約110時間で同ペプチドは反応系から完全に消失した。エピトープペプチドを再添加すると、誘導期を示さずただちにエピトープペプチドは分解され26数時間で完全に消失した。分解産物にはやはり、多くのペプチド分解断片が存在した。以上の結果およびこれまでの結果を合わせると、触媒三つ組み残基様構造とペプチダーゼ活性とがかなりの相関を持つことが判明した。

The main points of this year's research implementation plan are as follows: (1)Anti-helicobader pylori urease antibody, HpU series, HpU-1, 2, 9, 10, 17, 19, 20, UA series, UA-1, 7, 9, 15 As a result, HpU series related to HpU-1, 9, 18 and 20 are presumed to exist (UA series related to HpU-1, 9, 18 and 20 are still present, and three-dimensional structure is under construction). (2)HpU-2 and-18 Helicobader pylori were identified as α-subunit of HpU-2 and α-subunit of HpU-2 and α-subunit of HpU-2. Antigen decomposition of the antibody is carried out in the following ways: 183-204. The sequence SVELIDIGGNRIFNALVDR is chemically synthesized and used. As a result, HpU-9 is rapidly dissociated from the antigen. The decomposition products are identified by Mass and Very High. (3)HpU-18 is the same as HpU-18. It takes about 80 days for the antigen to decompose and about 110 days for the antigen to disappear completely. The induction period is 26 days and the time to complete the decomposition is 26 days. The decomposition product is not only a product, but also a fragment. The above results are combined with the results of the three groups of residues, the structure of the residues, the activity of the residues and the correlation between the residues.