複数の抗体酵素を用いての協同効果による標的タンパクの破壊に関する研究

多种抗体酶协同作用破坏靶蛋白的研究

基本信息

批准号：
13022261
负责人：
宇田泰三
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Hiroshima Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Helicobacter pylori菌の表面タンパク質として発現し、生体内尿素をアンモニアに変換することにより胃内で同菌の生存を支えている重要分子のウレアーゼを特異的に攻撃する抗体酵素を作製する事が本年度の研究実施計画の主要な点であったが、以下に示す事が明らかとなった。(1)抗Helicobader pylori urease体のうち、HpU系列ではこれまでに、HpU-1,2,9,10,17,18,19,20を、また、UA系列ではUA-1,7,9,15について解析を行った。その結果、HpU系列に関してはHpU-1,9,18,20に触媒三つ組み残基様構造の存在が推定された(UA系列は現在、立体構造を構築中)。(2)HpU-2および-18はHelicobader pylori菌のウレアーゼα-subunitのアミノ酸配列183-204および183-195をそれぞれ認識する。そこで抗体による抗原分解実験では、183-204に対応する配列SVELIDIGGNRRIFGFNALVDR(エピトープペプチド)を化学合成し、これを用いた。その結果、HpU-9軽鎖は急速にペプチド抗原を分解した。分解産物をMassで調べたところ、非常に多くのペプチド分解断片を確認した。(3)また、HpU-18軽鎖上記と同じ条件で混合したところ、約80時間の誘導期を経た後、やはりペプチド抗原の分解が始まり、約110時間で同ペプチドは反応系から完全に消失した。エピトープペプチドを再添加すると、誘導期を示さずただちにエピトープペプチドは分解され26数時間で完全に消失した。分解産物にはやはり、多くのペプチド分解断片が存在した。以上の結果およびこれまでの結果を合わせると、触媒三つ組み残基様構造とペプチダーゼ活性とがかなりの相関を持つことが判明した。

今年的研究实施计划的重点是生产一种抗体酶，该酶表示为幽门螺杆菌细菌的表面蛋白质，并将体内尿素转化为氨转化为氨，以特异性攻击尿素，这是一种支持细菌在胃中生存的重要分子，并且已经揭示了以下细菌。（1）在HPU系列中分析了抗螺旋体幽门螺肠尿素，HPU-1、2、9、10、17、18、19、20，UA系列中分析了UA-1、7、9、15。结果，估计了HPU-1、9、18和20中催化三重残基样结构的存在（UA系列目前正在构建三维结构）。（2）HPU-2和-18分别识别幽门螺杆菌的脲酶α-亚基的氨基酸序列183-204和183-195。因此，在使用抗体进行抗原降解的实验中，对应于183-204的序列Svelidiggnrrifgfnalvdr（表位肽）被化学合成和使用。结果，HPU-9轻链迅速降解了肽抗原。当通过质量检查降解产物时，发现大量肽片段。（3）此外，当HPU-18轻链在与上述相同的条件下混合时，在诱导阶段约80小时后，肽抗原的分解再次开始，大约110小时后，肽完全从反应系统中完全消失。重新加入表位肽后，表位肽立即降解而没有显示任何诱导阶段，并且在26小时内完全消失。同样，降解产物中存在许多降解肽的片段。结合了上述结果和先前的结果，发现催化三胞胎样结构和肽酶活性具有相当大的相关性。