Helicobacter pyloriに対する新規抗体薬剤の開発と高感度迅速測定

幽门螺杆菌新型抗体药物开发及高灵敏快速检测

• 批准号: 12019262
• 负责人: 宇田 泰三
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hiroshima Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12019262/
• 关键词: Helicobacter pylori; ウレアーゼ; 抗体; 酵素; 活性; エピトープマッピング; SPR

Helicobacter pylori(H.pylori)と胃疾患との関連から、胃中の強い酸性下でH.pyloriが胃粘膜への生着するのにそのウレアーゼが重要な役割を果たしている事が明らかになっている。本研究ではH.pyloriウレアーゼの活性を抑制するモノクローナル抗体の性質を遺伝子および立体構造の観点から検討し、以下の新しい知見を得た(1)H.pyloriウレアーゼに対するモノクローナル抗体(HpU)26クローンのうち、ウレアーゼ活性抑制効果を示すのは6クローンであるが、活性抑制率の最も高いHpU-2と2番目に高いHpU-18は、その超可変領域に特徴あるアミノ酸配列と立体構造を示した。(2)同程度の活性抑制率を示す4クローン(HpU-1,17,19,20)については、アミノ酸配列と親和性定数との間に相関が見られ、β-subunitを共に認識する結果と一致した。上記(1)、(2)の解析から、上記抗体の重鎖CDR-3が親和性とは別に抗原に対する特異性に関与していると推定された。(3)エピトープマッピングの実験より、HpU-18抗体はH.pyloriウレアーゼのα-subunitのアミノ酸配列196番目から204番目を認識していることが分かった。これはHpU-2抗体のエピトープマッピングより推定された配列およびSPRによる抗原認識部位の解析と一致しており、信頼性の高い結果となった。また、興味あることにHpU-18抗体軽鎖には特徴的な触媒三つ組み残基が存在している可能性が高いことが本研究で判った。

Helicobacter pylori (H.p ylori) と stomach disorders と の masato even か ら, under the strong の い acid in the stomach で H.p ylori が gastric mucosa へ の with す る の に そ の ウ レ ア ー ゼ が important な "を cut fruit た し て い る matter が Ming ら か に な っ て い る. This study で は H.p ylori ウ レ ア ー ゼ の inhibition す を る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の nature を posthumous son 伝 お よ び three-dimensional structure の 観 point か ら beg し, the following new し の 検 い knowledge を have た (1) H.p ylori ウ レ ア ー ゼ に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ antibody (HpU) 26 ク ル ロ ー ン の う ち, ウ レ ア ー ゼ activity Inhibition of unseen fruit を shown す の は 6 ク ロ ー ン で あ る の が, active suppression rate most high も い HpU - 2 と 2 times high に い HpU to 18 は, そ の に super can - field, 徴 あ る ア ミ ノ acid with column と three-dimensional structure を shown し た. (2) with the degree of の activity inhibition rate を す in 4 ク ロ ー ン,17,19,20 (HpU - 1) に つ い て は, ア ミ ノ acid with column と affinity constant と の に phase between masato が see ら れ, beta subunit を に know total す る と consistent し た. Written (1), (2) の analytic か ら antibody CDR の heavy lock, remember - 3 が affinity と は don't に antigen に す seaborne る specificity に masato and し て い る と presumption さ れ た. (3) エ ピ ト ー プ マ ッ ピ ン グ の be 験 よ り, HpU to 18 antibody は H.p ylori ウ レ ア ー ゼ の alpha subunit の ア ミ ノ acid with 196's eye か ら 204's mesh を know し て い る こ と が points か っ た. こ れ は HpU - 2 antibodies の エ ピ ト ー プ マ ッ ピ ン グ よ り presumption さ れ た match column お よ び SPR に よ る antigen know parts の parsing と consistent し て お り, letter 頼 の high い results と な っ た. ま た, tumblers あ る こ と に HpU to 18 antibody 軽 lock に は な catalyst of 徴 three つ み residues が exist し て い likely が る い こ と が で this study found っ た.

项目成果

T.Nishimura,E.Hifumi,T.Fujii,Y.Niimi,N.Egashira,K.Shimizu,T.Uda.: "Measurement of Helicobacter pylori using anti its urease monoclonal antibody by surface plasmon resonance."Electrochemistry. 68(11). 231-234 (2000)

T.Nishimura、E.Hifumi、T.Fujii、Y.Niimi、N.Egashira、K.Shimizu、T.Uda.：“通过表面等离子体共振使用抗幽门螺杆菌脲酶单克隆抗体测量幽门螺杆菌。”电化学。

E.Hifumi, K.Ohara, Y.Niimi, T.Uda: "Removal of catalytic activity by EDTA from antibody light chain"BioMetals. 13. 289-294 (2000)

E.Hifumi、K.Ohara、Y.Niimi、T.Uda：“通过 EDTA 从抗体轻链中去除催化活性”BioMetals。

森原史子,藤井亮治,藤原茜,一二三恵美,宇田泰三: "Helicobacter pyloriウレアーゼも活性を抑制するモノクローナル抗体HpU-2の性質と発現"平成12年日本生物工学会大会・講演要旨集. 239 (2000)

Fumiko Morihara、Ryoji Fujii、Akane Fujiwara、Emi Hifumi、Taizo Uda：“也抑制幽门螺杆菌脲酶活性的单克隆抗体 HpU-2 的特性和表达”2000 年日本生物工程学会会议摘要 239（2000 年）。

T.Uda,E.Hifumi,K.Ohara,Y.Zhou,: "Catalytic activity of antibody light chain to gp41 : A consideration of refolding in relation to activation mechanism."Chem.Immunol.. 77. 18-32 (2000)

T.Uda，E.Hifumi，K.Ohara，Y.Zhou，：“抗体轻链对 gp41 的催化活性：与激活机制相关的重折叠的考虑。”Chem.Immunol.. 77. 18-32 (2000