エイズウイルス外膜タンパクの機能消失を目的とする超分子構造体の作製に関する研究

旨在消除艾滋病病毒外膜蛋白功能的超分子结构制备研究

• 批准号: 09217249
• 负责人: 宇田 泰三
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Hiroshima Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09217249/
• 关键词: 超分子; エイズ; 抗体; ヘミン; gp41

今年度は以下に述べる項目を研究目標として取り上げ実験を行った。1、抗gp41モノクローナル抗体のエピトープマッピング、2、抗ポルフィリンモノクローナル抗体の塩基およびアミノ酸配列の決定、3、各抗体および分子認識部品の抗原親和性の決定、4、両受け皿分子の連結、5、標記超分子の構築と免疫化学的性質。1、については抗gp41抗体はgp41不変領域のN末側の1部をゆるく、中央部を強く認識しており、分子モデリングを行ってみると予想通りの結果となった。2、については天然型ポルフィリンであるヘミンに対するモノクローナル抗体1D3、および人工型ポルフィリンであTCPPに対するモノクローナル抗体2C12の可変領域の塩基配列を重鎖(H鎖)および軽鎖(L鎖)について行った。これらの配列については日本DNAデータバンク(DDBJ)に登録した。3、抗ヘミンモノクローナル抗体(1D3)CDRH-2の僅か17mer単独でも抗体可変領域のアミノ酸約230個が構成している高度な抗原認識部位よりも高い抗原親和性を示した事より超分子の受け皿分子Bのアミノ酸配列はこの抗体のH鎖あるいはそのCDRH-2を使用すれば良い。抗gp41抗体は軽鎖のCDR-1ペプチド(16mer)がgp41の保存領域抗原と非常に強い相互作用を持つことが判った。4、については遺伝子工学による方法と合成ペプチドによる方法の2種類を行った。前者では抗gp41抗体軽鎖(CDRL-1)と1D3抗体重鎖(CDRH-2)をスペーサーとして(-G4S-)3で連結し、scFVを構築し大腸菌で発現させた。後者ではスペーサーにGly-Proを用いた35merのペプチドNH2-(CDRL-1)-GP-(CDRH-2)-COOHがエイズ抗原およびポルフィリン分子を互いに接近して取り込む計算されたのでこの分子を一段でペプチド合成した。5、では35merペプチドを用いてCDスペクトルによりエイズ抗原及びポルフィリン抗原の両者の取り込み能を調べた。こうして製作した標記超分子のエイズ抗原分解活性を測定したところ弱酸性、反応温度60℃で数倍から10倍の反応促進作用を見出した。

今年，我们进行了一项实验，以以下项目为研究目标。 1, epitope mapping of anti-gp41 monoclonal antibodies, 2, determination of base and amino acid sequences of anti-porphyrin monoclonal antibodies, 3, determination of antigenic affinity of each antibody and molecular recognition component, 4, ligation of both saucer molecules, 5, construction and immunochemical properties of the labelled supramolecules.关于1，抗GP41抗体松散地识别出GP41不变区域N末端的部分，并强烈识别中心部分，并且在进行分子建模时，结果如所预期。对于2，在重链（H链）和轻链（L链）上对单克隆抗体1d3的可变区域的可变区域的基本序列和对Hemin，天然卟啉和TCPP的单克隆抗体2C12进行。这些序列已在日本DNA数据库（DDBJ）中注册。 3. Even with only 17mer of the antihemin monoclonal antibody (1D3) CDRH-2 alone, it exhibits higher antigen affinity than the advanced antigen recognition site composed of approximately 230 amino acids in the variable antibody region, so the H chain of this antibody or CDRH-2 can be used as the amino acid sequence of the supramolecular receiving molecule B. The anti-gp41 antibody发现与轻链CDR-1肽（16mer）与GP41的保守区域抗原具有非常强的相互作用。对于4种，进行了两种方法：基因工程和合成肽。在前者中，抗GP41抗体轻链（CDRL-1）和1d3抗体重链（CDRH-2）与（-g4s-）3构造SCFV并在大肠杆菌中表达。在后一种情况下，使用GLY-PRO作为间隔剂进行了35mer肽NH2-（CDRL-1）-GP-（CDRH-1）-COOH，以将AIDS抗原和卟啉分子固定在彼此接近，因此该分子在一个阶段中合成。在5中，使用35mer肽通过CD光谱检查了艾滋病和卟啉抗原的摄取能力。测量了所产生的指定超分子的AIDS抗原降解活性，并在60°C的反应温度下发现反应促进作用为几至十倍。

项目成果

宇田泰三、一二三恵美: "免疫親和性におけるべき乗則の存在とその意味" 平成9年度日本生物工学会予稿集. 147 (1997)

Taizo Uda、Emi Hifumi：“免疫亲和力中幂律的存在和意义”1997 年日本生物工程学会会议记录 147 (1997)。

宇田泰三、一二三恵美、西村知晃: "生体分子反応装置" 先端医療(Advanced Medicine). 4. 49-51 (1997)

Taizo Uda、Emi Hifumi、Tomoaki Nishimura：“生物分子反应装置”《先进医学》。4. 49-51 (1997)

木口隆、石丸正則、一二三恵美、宇田泰三: "抗エイズウイルスモノクローナル抗体のキャラクタリゼーション(I)" 日本化学会第72春季年会予稿集. 608 (1997)

Takashi Kiguchi、Masanori Ishimaru、Emi Hifumi、Taizo Uda：“抗艾滋病病毒单克隆抗体的特性（I）”日本化学会第 72 届春季年会记录 608（1997）。

N.Miura, K.Ogata, G.Sakai, T.Uda, N.Yamazoe: "Detection of morphine in ppb range by using SPR (Surface Plasmon Rexonance) immunosensor." Chem. Lett.713-714 (1997)

N.Miura、K.Ogata、G.Sakai、T.Uda、N.Yamazoe：“使用 SPR（表面等离子体激元共振）免疫传感器检测 ppb 范围内的吗啡。”

G.Sakai, T.Saiki, T.Uda, N.Miura, N.Yamazoe: "Evaluation of binding of human serum albumin (HSA) to monoclonal and polyclonal antibody by means of piezoelectric immunosensing technique." Sensors & Actuators B. 42. 89-94 (1997)

G.Sakai、T.Saiki、T.Uda、N.Miura、N.Yamazoe：“通过压电免疫传感技术评估人血清白蛋白 (HSA) 与单克隆和多克隆抗体的结合。”