エイズウイルス外膜タンパクの機能消失を目的とする超分子構造体の作製に関する研究

旨在消除艾滋病病毒外膜蛋白功能的超分子结构制备研究

• 批准号: 09217249
• 负责人: 宇田 泰三
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Hiroshima Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09217249/
• 关键词: 超分子; エイズ; 抗体; ヘミン; gp41

今年度は以下に述べる項目を研究目標として取り上げ実験を行った。1、抗gp41モノクローナル抗体のエピトープマッピング、2、抗ポルフィリンモノクローナル抗体の塩基およびアミノ酸配列の決定、3、各抗体および分子認識部品の抗原親和性の決定、4、両受け皿分子の連結、5、標記超分子の構築と免疫化学的性質。1、については抗gp41抗体はgp41不変領域のN末側の1部をゆるく、中央部を強く認識しており、分子モデリングを行ってみると予想通りの結果となった。2、については天然型ポルフィリンであるヘミンに対するモノクローナル抗体1D3、および人工型ポルフィリンであTCPPに対するモノクローナル抗体2C12の可変領域の塩基配列を重鎖(H鎖)および軽鎖(L鎖)について行った。これらの配列については日本DNAデータバンク(DDBJ)に登録した。3、抗ヘミンモノクローナル抗体(1D3)CDRH-2の僅か17mer単独でも抗体可変領域のアミノ酸約230個が構成している高度な抗原認識部位よりも高い抗原親和性を示した事より超分子の受け皿分子Bのアミノ酸配列はこの抗体のH鎖あるいはそのCDRH-2を使用すれば良い。抗gp41抗体は軽鎖のCDR-1ペプチド(16mer)がgp41の保存領域抗原と非常に強い相互作用を持つことが判った。4、については遺伝子工学による方法と合成ペプチドによる方法の2種類を行った。前者では抗gp41抗体軽鎖(CDRL-1)と1D3抗体重鎖(CDRH-2)をスペーサーとして(-G4S-)3で連結し、scFVを構築し大腸菌で発現させた。後者ではスペーサーにGly-Proを用いた35merのペプチドNH2-(CDRL-1)-GP-(CDRH-2)-COOHがエイズ抗原およびポルフィリン分子を互いに接近して取り込む計算されたのでこの分子を一段でペプチド合成した。5、では35merペプチドを用いてCDスペクトルによりエイズ抗原及びポルフィリン抗原の両者の取り込み能を調べた。こうして製作した標記超分子のエイズ抗原分解活性を測定したところ弱酸性、反応温度60℃で数倍から10倍の反応促進作用を見出した。

This year, に the following に described the べる project を research objective と と て て to obtain げ practical experience を and った. 1, gp41 モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の エ ピ ト ー プ マ ッ ピ ン グ, 2, fight ポ ル フ ィ リ ン モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の salt base お よ び ア ミ ノ acid with column の decision, 3, each antibody お よ び molecular recognition part の antigen affinity の decision, 4, and struck by け melamine molecular の links, 5, and mark supramolecular の build と immunochemical properties. 1, に つ い て は gp41 antibody resistance は gp41 - not at the end of the field の N one side の を ゆ る く, strong central department を く know し て お り, molecular モ デ リ ン グ を line っ て み る と to think り の results と な っ た. Type 2, に つ い て は natural ポ ル フ ィ リ ン で あ る ヘ ミ ン に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody 1 d3, お よ び type artificial ポ ル フ ィ リ ン で あ TCPP に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody 2 c12 の can - field の salt base with column を heavy lock lock (H) お よ び 軽 lock (lock) L に つ い て line っ た. The に れら is matched with the に れら て て て て Japanese DNAデ タバ タバ タバ に た (DDBJ)に registration た た. 3, resisting ヘ ミ ン モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies (1 d3) CDRH - 2 の か only 17 killing 単 alone で も antibodies could - field の ア ミ ノ acid about 230 が し て い る highly な antigen know parts よ り も high い antigen affinity を shown し た matter よ り supramolecular の by け melamine molecular B の ア ミ ノ acid with column は こ の antibody の H lock あ る い は そ の CD RH-2を uses すれば good を. Antibodies against gp41 は 軽 lock の CDR - 1 ペ プ チ ド killing (16) が gp41 の preservation areas antigen と を hold very strong に い interaction つ こ と が convicted っ た. 4. Youdaoplaceholder0, に, に, て, て, 伝, engineering による methods と, synthetic ペプチドによる methods <s:1>, 2 kinds, を, った. The former で は gp41 antibody resistance 軽 lock (CDRL - 1) と 1 d3 antibody heavy lock (CDRH - 2) を ス ペ ー サ ー と し て (G4S -) 3 で link し, scFV を build し coliform で 発 now さ せ た. The latter で は ス ペ ー サ ー に Gly - Pro を with い た 35 killing の ペ プ チ ド NH2 - (CDRL - 1) - GP - (CDRH - 2) - COOH が エ イ ズ antigen お よ び ポ ル フ ィ リ ン molecular を mutual い に near し て take り 込 む computing さ れ た の で こ の molecular を a で ペ プ チ ド synthetic し た. 5, で は 35 killing ペ プ チ ド を with い て CD ス ペ ク ト ル に よ り エ イ ズ antigen and び ポ ル フ ィ リ ン antigen の struck is の take り 込 み to を べ た. こ う し て making し た tag supramolecular の エ イ ズ antigen determination of decomposition activity を し た と こ ろ weak acid and anti 応 temperature 60 ℃ several times で か ら 10 times の anti 応 promotes を shows し た.

项目成果

宇田泰三、一二三恵美: "免疫親和性におけるべき乗則の存在とその意味" 平成9年度日本生物工学会予稿集. 147 (1997)

Taizo Uda、Emi Hifumi：“免疫亲和力中幂律的存在和意义”1997 年日本生物工程学会会议记录 147 (1997)。

宇田泰三、一二三恵美、西村知晃: "生体分子反応装置" 先端医療(Advanced Medicine). 4. 49-51 (1997)

Taizo Uda、Emi Hifumi、Tomoaki Nishimura：“生物分子反应装置”《先进医学》。4. 49-51 (1997)

木口隆、石丸正則、一二三恵美、宇田泰三: "抗エイズウイルスモノクローナル抗体のキャラクタリゼーション(I)" 日本化学会第72春季年会予稿集. 608 (1997)

Takashi Kiguchi、Masanori Ishimaru、Emi Hifumi、Taizo Uda：“抗艾滋病病毒单克隆抗体的特性（I）”日本化学会第 72 届春季年会记录 608（1997）。

N.Miura, K.Ogata, G.Sakai, T.Uda, N.Yamazoe: "Detection of morphine in ppb range by using SPR (Surface Plasmon Rexonance) immunosensor." Chem. Lett.713-714 (1997)

N.Miura、K.Ogata、G.Sakai、T.Uda、N.Yamazoe：“使用 SPR（表面等离子体激元共振）免疫传感器检测 ppb 范围内的吗啡。”

G.Sakai, T.Saiki, T.Uda, N.Miura, N.Yamazoe: "Evaluation of binding of human serum albumin (HSA) to monoclonal and polyclonal antibody by means of piezoelectric immunosensing technique." Sensors & Actuators B. 42. 89-94 (1997)

G.Sakai、T.Saiki、T.Uda、N.Miura、N.Yamazoe：“通过压电免疫传感技术评估人血清白蛋白 (HSA) 与单克隆和多克隆抗体的结合。”