免疫調節遺伝子とのフュージョンDNAワクチンによる細胞内寄生原虫感染制御の新戦略

使用具有免疫调节基因的融合DNA疫苗控制细胞内原虫感染的新策略

• 批准号: 14021086
• 负责人: 姫野 國祐
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021086/
• 关键词: 細胞内寄生病原体; トキソプラズマ; DNAワクチン; フュージョンDNA; ユビキチンプロテアソーム系; MHCクラスI; CD8^+T細胞

本年度は主としてトキソプラズマ強毒株(RH株)感染に対するフュージョンDNAワクチン法を確立した。1)まずトキソプラズマ抗原遺伝子であるSAG-1遺伝子とユビキチン遺伝子の融合を行った後にCOS-7細胞にそのフュージョンDNAを定常発現させ、抗SAG-1抗体で免疫沈降させた後に抗ユビキチン抗体を用いWestern blottingでSAG-1とユビキチンのフュージョン蛋白質が産生されることを確認した。2)ついで、ユビキチン遺伝子とSAG-1遺伝子を融合させることにより、SAG-1遺伝子産物がプロテアソームでprocessingを受けることを1)で用いたCOS-7細胞とプロテアソーム阻害剤であるMG-132を用いて間接的に証明した。3)本融合遺伝子でBALB/cマウスに2週間毎に4回、遺伝子銃を用いてDNAワクチンを行い、最終ワクチンの2週間後にトキソプラズマRH株を感染させた。その結果、SAG-1遺伝子によるDNAワクチンでは全く効果がなかったが、ユビキチン-SAG-1融合遺伝子によるDNAワクチンでは90%以上のマウスが生存し、強いワクチン効果が証明された。さらにユビキチン-SAG-1遺伝子ワクチン群ではSAG-1を標的とした強いCD8^+T細胞によるキラー活性が認められた。4)本法のごとくユビキチンプロテアソーム系の応用によるDNAワクチン法は細胞内寄生病原体に対する全く新規の、そして強力なDNAワクチン法であり、結核菌に対しても有効なワクチン法であることが示唆された。5)現在、結核菌に対するユビキチンプロテアソーム系の応用によるDNAワクチン法を抗原遺伝子として、Ag85B,MPB51遺伝子およびHSP65遺伝子とユビキチン遺伝子のフュージョン遺伝子の構築を完了している。

This year, the main virus (RH strain) infection is established. 1) SAG-1 gene fusion protein protein production in COS-7 cells was confirmed by Western blotting of anti-SAG-1 antibody and Western blotting of anti-SAG-1 antibody. 2) The fusion of SAG-1 gene with COS-7 cells was proved indirectly by MG-132. 3) The fusion gene was infected by BALB/c virus every 2 weeks, and the fusion gene was infected by RH virus every 2 weeks. The results showed that SAG-1 fusion gene DNA was more than 90% viable and strong than SAG-1 fusion gene DNA. The SAG-1 gene pool is targeted at CD8 + T cells, and the activity of CD8 +T cells is recognized. 4) The method of DNA sequencing for intracellular parasitic pathogens is a new and powerful method for detecting tuberculosis. 5)At present, the construction of antigen-containing gene, Ag85B, MPB51 gene and HSP65 gene has been completed in the application of DNA sequencing method in tuberculosis control system.

项目成果

Nishitani, M., Himeno, K.et al.: "A convenient cancer vaccine therapy with in vivo transfer of interleukin 12 expression plasmid using gene gun technology after priming with irradiated carcinoma cells"Cancer Gene Therapy. 9・2. 156-163 (2002)

Nishitani, M., Himeno, K.等人：“用基因枪技术在照射癌细胞后进行体内转移白细胞介素 12 表达质粒的便捷癌症疫苗疗法”癌症基因治疗 9・2。 (2002)

Sakai T., Himeno K.et al.: "Gene gun-based co-immunization of merozoite surface protein-1 cDNA with IL-12 expression plasmid confers protection against lethal Plasmodium yoelii in A/J mice"Vaccine. (in press). (2002)

Sakai T.、Himeno K.等人：“基于基因枪的裂殖子表面蛋白-1 cDNA 与 IL-12 表达质粒的联合免疫可在 A/J 小鼠中提供针对致命约氏疟原虫的保护”疫苗。

Nakano, Y., Himeno, K.et al.: "Roles of NKT cells in resistance against infection with Toxoplasma gondii and in expression of heat shock protein 65 in the host macrophages"Microbes and Infection. 4・1. 1-11 (2002)

Nakano, Y., Himeno, K.等人：“NKT 细胞在抵抗弓形虫感染和宿主巨噬细胞中表达热休克蛋白 65 中的作用”微生物与感染 1-11。 2002）

Sakai T., Himeno K.: "Gene gun-based in vivo gene transfer. Application to DNA vaccination"Methods Mol Biol.. 215. 181-191 (2003)

Sakai T.，Himeno K.：“基于基因枪的体内基因转移。DNA疫苗接种的应用”Methods Mol Biol.. 215. 181-191 (2003)