ユビキチンプロテアソーム系の応用による細胞内寄生原虫に対するDNAワクチンの開発

利用泛素蛋白酶体系统开发针对细胞内原生动物的 DNA 疫苗

• 批准号: 15019075
• 负责人: 姫野 國祐
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019075/
• 关键词: DNAワクチン; 細胞内寄生原虫; トキソプラズマ; SAG-1; ユビキチン融合遺伝子; CD8^+T細胞; プロテアソーム阻害剤; PA28ノックアウトマウス

本年度は主としてトキソプラズマ強毒株(RH株)感染に対するフュージョンDNAワクチン法を確立した。1)まずトキソプラズマ抗原遺伝子であるSAG-1遺伝子とユビキチン遺伝子の融合を行った後にCOS-7細胞にそのフュージョンDNAを定常発現させ、抗SAG-1抗体で免疫沈降させた後に抗ユビキチン抗体を用いWestern blottingで確認した。2)ついで、ユビキチン遺伝子とSAG-1遺伝子を融合させることにより、SAG-1遺伝子産物がプロテアソームでprocessingを受けることを1)で用いたCOS-7細胞とプロテアソーム阻害剤であるMG-132を用いて間接的に証明した。3)本融合遺伝子でBALB/cマウスに2週間毎に4回、遺伝子銃を用いてDNAワクチンを行い、最終ワクチンの2週間後にトキソプラズマRH株を感染させた。図AのごとくSAG-1遺伝子によるDNAワクチンでは全く効果がなかったが、ユビキチン-SAG-1融合遺伝子によるDNAワクチンでは90%以上のマウスが生存し、強いワクチン効果が証明された。さらにユビキチン-SAG-1遺伝子ワクチン群ではSAG-1を標的とした強いCD8^+T細胞によるキラー活性が認められた。4)本法のごとくユビキチンプロテアソーム系の応用によるDNAワクチン法は細胞内寄生病原体に対する全く新規の、そして強力なDNAワクチン法であり、結核菌に対しても有効なワクチン法であることが示唆された。5)なお、本DNAワクチン法は前述のごとくユビキチンプロテアソーム系の応用によるものであるので免疫プロテアソーム調節ユニットであるPA28α/βに依存しない経路を使用していることが明らかとなった。

This year, we have reported that the virulent strain (RH strain) has been infected by the virus (RH strain). This year, the virus has been infected by the virulent strain (RH strain). 1) Cos-7 cells were fused to detect SAG-1 antibodies and DNA antibodies were detected. Anti-SAG-1 antibodies were immunized and immunized. Anti-SAG-1 antibodies were confirmed by Western blotting assay. 2) use the COS-7 cell to block the damage caused by the fusion of the SAG-1 sub-unit, the SAG-1 sub-unit and the SAG-1 sub-unit. 3) in this fusion, the BALB/c virus was used for 4 times, and the RH strain was infected with the RH strain after the fusion was performed. "A", "SAG-1", "sub", "DNA", "full", "full", "DNA", "fusion", "over 90%", "Survival", "strong", "clear". Please check the activity of the group SAG-1

项目成果

M.Zhang, K.Himeno et al.: "Melanoma immunotherapy by a DNA vaccine based on the ubiquitin-proteasome pathway."Gene Therapy. (in press). (2004)

M.Zhang、K.Himeno 等人：“通过基于泛素-蛋白酶体途径的 DNA 疫苗进行黑色素瘤免疫治疗。”基因治疗。

Y.Li, K.Himeno et al.: "IL-18 gene therapy develops Th1-type immune responses in Leishmania major-infected BALB/c mice : is the effect mediated by the CpG signaling TLR9?"Gene Therapy. (in press). (2004)

Y.Li、K.Himeno 等人：“IL-18 基因治疗在利什曼原虫重度感染的 BALB/c 小鼠中产生 Th1 型免疫反应：这种效应是由 CpG 信号传导 TLR9 介导的吗？”基因治疗。

S.Hamano, K.Himeno et al.: "WSX-1 is required for resistance to Trypanosoma cruzi infection by regulation pro-inflammatory cytokine production."Immunity. 19・5. 657-667 (2003)

S. Hamano、K. Himeno 等人：“WSX-1 是通过调节促炎细胞因子的产生来抵抗克氏锥虫感染所必需的。”19・5 (2003)。

H.Hisaeda, K.Himeno et al.: "Escape of malaria parasites from host immunity requires CD4^+CD25^+regulatory T cells."Nature Medicine. 10・1. 29-30 (2004)

H.Hisaeda、K.Himeno 等人：“疟原虫从宿主免疫中逃脱需要 CD4^+CD25^+ 调节性 T 细胞。”《自然医学》10・1（2004 年）。

K.Onishi, K.Himeno et al.: "Cathepsin L is crucial for Th1-type immune response during Leishmania major infection."Microbes and Infection. (in press). (2004)

K.Onishi、K.Himeno 等人：“组织蛋白酶 L 对于利什曼原虫重大感染期间的 Th1 型免疫反应至关重要。”微生物与感染。