ユビキチンプロテアソームシステムの応用による癌遺伝子ワクチンの開発研究

应用泛素蛋白酶体系统研发癌症基因疫苗

• 批准号: 15025255
• 负责人: 姫野 國祐
• 金额: $ 2.62万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025255/
• 关键词: DNAワクチン; メラノーマ; フュージョンDNA; TRP-2; ユビキチン融合遺伝子; CD8^+T細胞; プロテアソーム阻害剤; PA28ノックアウトマウス

近年、田中等によりペプチド抗原をユビキチン化することにより、その抗原がプロテアソームでプロセッシングを受け必然的にMHCクラスI分子に提示されるため抗原特異的CD8+T細胞が効率よく誘導されることが証明された(Immune.Rev.:163;161-76,1998)1)本申請研究ではまずマウスメラノーマ由来のTRP-2遺伝子とユビキチン遺伝子の融合遺伝子(フュージョンDNA)を構築した。(なお、メラノーマ以外にマウス肺癌(3LL)およびマウス消化管(colon26)を用いて同様の研究を行っている)2)in vivoの動物実験の前に構築したワクチンベクターを様々な細胞株に遺伝子導入を行って発現の確認を行い、抗原蛋白のプロセッシングおよび抗原提示機構を解析した。この目的のためプロテアソーム阻害剤であるMG-132、エポキソマイシン等を用いて、抗原蛋白質のプロセッシングにおけるプロテアソームの役割について確認を行った。3)上記フュージョンDNA(メラノーマにおいてはubiqitin-TRP-2遺伝子(以下pcUB-TRP-2))を用いてC57BL/6マウスにDNAワクチンを一週間毎に3度行った。ワクチンは生体への遺伝子導入効率の優れた遺伝子銃を用いた。最終ワクチン終了後2週間目にC57BL/6マウス由来のB16メラノーマを移植した。腫瘍増殖に程度を系に知的に計測した。TRP-2遺伝子でワクチンした宿主マウスでは腫瘍増殖抑制効果は全く認められず腫瘍は増殖を続け、40日目までに全マウスが腫瘍死した。一方、pcUB-TRP-2遺伝子によりワクチンを受けた宿主マウスでは移植腫瘍の増殖は顕著に抑制された。4)このフュージョンDNAによるワクチンを受けたC57BL/6マウスではB16メラノーマの転移も著しく抑制され、強い抗腫瘍免疫が誘導されていることがこの現象から確認された。5)上記ワクチンによる抗腫瘍効果はTRP-2特異的なCD8^+キラーT細胞により担当されていることが証明された。なお、この実験系はCD4^+T細胞の関与は認められなかった。6)上記ワクチンによる抗腫瘍免疫はproteasome activatorであるPA28α/βをノックアウトしたマウスでは誘導されたことによりユビキチンプロテアソーム経路へTRP-2抗原が効率よく提示され、活性の強いCD8^+キラーT細胞が誘導されることが証明された。7)ユビキチンプロテアソーム経路の応用による抗腫瘍効果の誘導はマウス肺癌の系でも認められた。

In recent years, Tanaka et al. have demonstrated that antigen-specific CD8 +T cells can be induced by MHC I molecules. 163;161- 76, 1998)1) The present application studies the construction of TRP-2 gene and fusion gene (DNA). (2) Construction of the digestive tract (colon26)in vivo, confirmation of gene introduction into cell lines, analysis of antigen protein selection and antigen presentation mechanisms. The purpose of this study is to determine the use of MG-132, MG-132, MG-132 3)Note that the DNA of C57BL/6 is used in the DNA of Ubiqitin-TRP-2 gene (hereinafter pcUB-TRP-2). The best way to improve the efficiency of gene transfer is to use the gene transfer method. C57BL/6 was transplanted 2 weeks after the final test. The degree of swelling is measured by the knowledge The TRP-2 gene was found to inhibit the proliferation of the tumor cells in the host. The pcUB-TRP-2 gene was used to inhibit the proliferation of tumor cells. 4) The C57BL/6 gene was detected by DNA sequencing, and the B16 gene was detected by DNA sequencing. 5)The anti-tumor effect of TRP-2-specific CD8 + T cells was demonstrated in the above report. CD4^+T cells are related to the recognition of CD4^+T cells. 6)In the above note, the anti-tumor immune response proteasome activator can be induced by PA28 α/β. The activity of TRP-2 antigen can be detected by CD8^+ T cell induction. 7) The application of anti-tumor drugs in lung cancer

项目成果

M.Zhang, K.Himeno et al.: "Melanoma immunotherapy by a DNA vaccine based on the ubiquitin-proteasome pathway."Gene Therapy. (in press). (2004)

M.Zhang、K.Himeno 等人：“通过基于泛素-蛋白酶体途径的 DNA 疫苗进行黑色素瘤免疫治疗。”基因治疗。

Y.Li, K.Himeno et al.: "IL-18 gene therapy develops Th1-type immune responses in Leishmania major-infected BALB/c mice : is the effect mediated by the CpG signaling TLR9?"Gene Therapy. (in press). (2004)

Y.Li、K.Himeno 等人：“IL-18 基因治疗在利什曼原虫重度感染的 BALB/c 小鼠中产生 Th1 型免疫反应：这种效应是由 CpG 信号传导 TLR9 介导的吗？”基因治疗。

S.Hamano, K.Himeno et al.: "WSX-1 is required for resistance to Trypanosoma cruzi infection by regulation pro-inflammatory cytokine production."Immunity. 19・5. 657-667 (2003)

S. Hamano、K. Himeno 等人：“WSX-1 是通过调节促炎细胞因子的产生来抵抗克氏锥虫感染所必需的。”19・5 (2003)。

H.Hisaeda, K.Himeno et al.: "Escape of malaria parasites from host immunity requires CD4^+CD25^+regulatory T cells."Nature Medicine. 10・1. 29-30 (2004)

H.Hisaeda、K.Himeno 等人：“疟原虫从宿主免疫中逃脱需要 CD4^+CD25^+ 调节性 T 细胞。”《自然医学》10・1（2004 年）。

K.Onishi, K.Himeno et al.: "Cathepsin L is crucial for Th1-type immune response during Leishmania major infection."Microbes and Infection. (in press). (2004)

K.Onishi、K.Himeno 等人：“组织蛋白酶 L 对于利什曼原虫重大感染期间的 Th1 型免疫反应至关重要。”微生物与感染。