がんの遺伝子治療に向けた超機能性人工オリゴヌクレオチドの創製

创造用于癌症基因治疗的超功能人工寡核苷酸

• 批准号: 14030045
• 负责人: 今西 武
• 金额: $ 2.62万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030045/
• 关键词: 人工核酸; オリゴヌクレオチド; アンチセンス法; BNA; HCV; NF-kB; 翻訳阻害; 遺伝子治療

我々は、天然ヌクレオシドの糖部を架橋構造化によりN型やS型立体配座に固定した新しい人工核酸(BNA類)モノマー類を種々開発し、それらを導入したオリゴヌクレオチド(ODN)類の有用性について検討している。それらBNA類の中で、相補鎖RNAに対して極めて強く結合する2',4'-BNAで修飾したODN(BNA-ODN)を種々合成し、それらのアンチセンス分子としての機能評価を行なった。HepG2培養細胞中でC型肝炎ウイルス(HCV)を標的としたBNA-ODNによるアンチセンス効果をレポータープラスミドを用いて検討した結果、ループ構造の翻訳開始コドン近傍のみならずステム構造領域を標的部位とした場合でも、特異的で良好なアンチセンス効果が認められた。BNA-ODNの代わりに同配列のアンチセンス天然DNA-ODNでは全く効果がなく、ホスホロチオアート型PS-ODNでは非特異的な発現制御が認められるのみであった。また、先に述べた外来遺伝子のみならず、細胞内在性遺伝子を標的としたアンチセンス評価も検討した。すなわち、アポトーシスに深く関与している転写因子NF-κBのサブタイプの一つp65遺伝子についてBNA-ODNによるアンチセンス効果をHeLa細胞中で検討したところ、良好なアンチセンス効果が認められる結果となった。さらに、ODN分子の細胞内移行を向上させるため、さまざまな手法についても検討を加えた。

We have been studying the usefulness of artificial nucleic acids (BNA) by bridging the sugar moiety of natural nucleic acids with N-type and S-type steric ligands and introducing them into the genome. BNA-like RNA is closely linked to 2',4'-BNA-modified ODN(BNA-ODN), and functional evaluation of BNA-modified ODN molecules is carried out. HepG2 cells in culture of hepatitis C virus (HCV) target BNA-ODN, the results of the study, the structure of the start of the transformation near the target site of the structure of the site, the situation, specific, good results of the study. BNA-ODN is a natural DNA-ODN, but it is not a specific DNA-ODN. In addition, the gene expression of foreign genes and the gene expression of intrinsic genes are discussed in detail. In HeLa cells, the expression of NF-κB in the p65 gene was detected and the expression of NF-κ B was detected. The intracellular migration of ODN molecules is discussed in detail.

项目成果

今西 武, 小比賀 聡: "アンチセンスBNAオリゴヌクレオチドを用いた遺伝子発現抑制"日薬理誌. 120. 85-90 (2002)

Takeshi Imanishi，Satoshi Obiga：“使用反义 BNA 寡核苷酸抑制基因表达”日本药理学杂志 120. 85-90 (2002)。

Obika, S., Morio, K., Nanbu, D., Hari, Y., Itoh, H., Imanishi, T.: "Synthesis and conformation of 3',4'-BNA monomers, 3'-O,4'-C-methyleneribonucleosides"Tetrahedron. 58. 3039-3049 (2002)

Obika, S.、Morio, K.、Nanbu, D.、Hari, Y.、Itoh, H.、Imanishi, T.：“3,4-BNA 单体的合成和构象，3-O,4

Obika, S., Hari, Y., Sekiguchi, M., Imanishi, T.: "Stable Oligonucleotide-directed Triplex Formation at Target Sites Containing CG Interruptions Strong and Sequence-specific Recognition by 2',4'-Bridged Nucleic Acid Bearing 2-Pyridones und Physiological C

Obika, S.、Hari, Y.、Sekiguchi, M.、Imanishi, T.：“在含有 CG 中断的目标位点上稳定寡核苷酸引导的三链体形成，通过 2,4-桥接核酸轴承进行强序列特异性识别

Obika, S., Sekiguchi, M., Osaki, T., Shibata, N., Masaki, M., Heri, Y., Imanishi, T.: "Synthesis and Conformation of a Novel Bridged Nucleoside with S-type Sugar Puckering, Trans -3',4'-BNA Monomer"Tetrahedron Lett.. 43. 4365-4368 (2002)

Obika, S.、Sekiguchi, M.、Osaki, T.、Shibata, N.、Masaki, M.、Heri, Y.、Imanishi, T.：“具有 S 型糖褶皱的新型桥接核苷的合成和构象

Morita, K., Hasegawa, C., Kaneko, M., Tsutumi, S., Sone, J., Ishikawa, T., Imanishi, T., Koizumi M.: "2'-0,4'-C-Ethylene-Bridged Nucleic Acids(ENA) : Highly Nuclease-resistant and Thermodynamically Stable Oligonucleotides for Antisense Drug"Bioorg. Med. C

森田 K.、长谷川 C.、金子 M.、堤 S.、曾根 J.、石川 T.、今西 T.、小泉 M.：“2-0,4-C-