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デンドリティックポリリジンを使ったin vivo遺伝子デリバリー

使用树突状聚赖氨酸进行体内基因递送

基本信息

批准号：
16023251
负责人：
新留琢郎
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではデンドリティックポリリジンを遺伝子キャリアーの基礎分子として採用し、in vivo遺伝子デリバリーシステムを構築することを目的としている。この分子はプラスミドDNAと表面電荷が中性の複合体を形成し、その複合体をマウス尾静脈より投与すると、投与量の数パーセントのDNAが3時間程度血中を安定に滞留する。また、担がんマウスの腫瘍部にもDNAの存在が認められた。さらに血中滞留性を向上させるために、分子表面に128個あるアミノ基の5%をPEG鎖で修飾した。その結果、DNAとの複合体は200nm程度で、そのサイズは長時間安定だった。PEG鎖が複合体間の凝集をふせいだものと考えられる。また、培養細胞に対してのトランスフェクションは低下した。これも、PEG鎖の修飾効果で、細胞への非特異的な吸着が抑制されたものと考えられる。細胞への認識能を高めるためにこのPEG鎖の先端に腫瘍組織を選択的に認識する環状RGDペプチドを修飾させることを試みた。修飾は3ステップの化学合成で完了し、収率よく合成できた。一方、デンドリティックポリリジンと同等の大きさをもつ金ナノ粒子でも同様の検討も行った。金ナノ粒子はその簡便な調製法や光応答性といったユニーク特性を持っており、新たな遺伝子キャリアー物質として期待できる。本研究ではアミノ基とPEG鎖を表面に修飾した金ナノ粒子の作製に成功した。そして、このDNAとの複合体をマウス尾静脈より投与した結果、数十分にわたるDNAの血中滞留が認められた。一方、金の臓器分布を調べた結果、血中に数時間にわたり認められ、PEG化することによって血中でのステルス性を獲得したことがわかった。また、尾静脈投与後、肝臓に電気パルスを与えると、血中を循環していたDNAがその部分で細胞内に移行し、効率よく遺伝子発現することがわかった。

The purpose of this study is to construct a molecular basis for the development of genetic engineering in vivo. The molecule forms a neutral complex of DNA surface charges, and the complex is injected into the tail vein. The amount of DNA injected into the tail vein is 3 times that of the stable blood. The presence of DNA in the tumor is recognized. 128 PEG residues were found on the surface of the molecule. The DNA complex is stable at 200nm. PEG lock complex aggregation The cell culture process is very slow. The effects of PEG modification on cell adhesion and non-specific sorption were investigated. Cell recognition can be improved by PEG lock and tissue selection. The chemical synthesis of modified compounds is complete, and the synthesis rate is high. A party, a party A simple modulation method for gold particles and optical properties is proposed. In this study, the preparation of gold particles was successfully carried out by surface modification with PEG. The DNA complex was injected into the tail vein, and the DNA was retained in the blood. A party, gold and silver distribution of the results, blood in the number of recognition, PEG, blood in the number of people to obtain After injection into the caudal vein, the liver is electrically activated and the blood circulates in the middle of the cell.