二量体化ライブラリーを用いた増殖・抗アポプトーシス関連遺伝子の単離

使用二聚化文库分离增殖/抗凋亡相关基因

• 批准号: 12215028
• 负责人: 渡辺 すみ子
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215028/
• 关键词: GM-CSF; 血球細胞; 二量体化; DNA gyrase; エストロジェンレセプター

本研究ではDNA gyraseあるいはエストロジェンレセプターなどの人為的2量体化システムを用いてライブラリーを作成し、細胞増殖あるいは抗アポプトーシス活性を指標に、2量体化によって活性化を受ける新規分子の単離を目標とした。当初の計画どうりレトロウイルスライブラリーを用いることとし、エストロジェンレセプター、DNA gyraseそれぞれと融合蛋白質となるようなライブラリーを作成し、マウスIL-3依存性株であるBa/F3細胞に導入した。その後IL-3非依存性に増殖するクローン、ガンマ線照射後も生存するクローンを単離し、genomic PCRによりレトロウイルスにより染色体中に導入された遺伝子を単離した。その結果、IL-3非依存的に増殖する株からは融合蛋白質をコードすると思われる配列が見いだされず、IL-3非依存性の増殖はインサーションミュタジェネシスによるものと予想された。一方、ガンマ線照射に対し耐性になる株からはヒストンアセチレース2のマウスホモログが単離された。このものが、ガンマ線照射に対して実際に耐性となるのかどうか検討を加えている。

In this study, we developed an artificial 2-dimensional system for DNA gyrase and cell culture, and established an indicator of anti-DNA gyrase activity and 2-dimensional system activation for the purpose of molecular isolation. The original plan was to introduce Ba/F3 cells with IL-3-dependent strains into Ba/F3 cells. After the IL-3 independent amplification, the gene expression was isolated from the chromosome by genomic PCR. As a result, IL-3-independent growth was observed in the expression of fusion protein. The first step is to reduce the radiation intensity of the plant and the second step is to reduce the radiation intensity. This is the first time I've ever seen a person who's been exposed to radiation.

项目成果

Okubo,T.: "Effect of human granulocyte-macrophage colony stimulating factor (hGM-CSF) on lymphoid and myeloid differentiation of sorted hematopoietic stem cells from hGM-CSF receptor gene transgenic mice."J.Biochem.. 127. 591-596 (2000)

Okubo,T.：“人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (hGM-CSF) 对来自 hGM-CSF 受体基因转基因小鼠的分选造血干细胞的淋巴和骨髓分化的影响。”J.Biochem.. 127. 591-596

Watanabe,S.: "Initiation of polyoma virus origin dependent DNA replication through STAT5 activation by human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF)."Blood. (in press).

Watanabe,S.：“通过人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF) 激活 STAT5 来启动多瘤病毒起源依赖性 DNA 复制。”血液。

Liu,R.: "Signals for prevention of g irradiation-induced apoptosis by hGM-CSF."Oncogene. 19. 571-579 (2000)

Liu，R.：“hGM-CSF 预防 g 辐射诱导细胞凋亡的信号。”癌基因。

Harada,Y.: "Cyclic AMP inhibits the activity of c-Jun N-terminal kinase 2 (JNK2) but not JNK1 and ERK2, in human helper T lymphocytes."Biochem.Biophys.Res.Comm.. 266. 129-134 (2000)

Harada,Y.：“环 AMP 抑制人类辅助 T 淋巴细胞中 c-Jun N 末端激酶 2 (JNK2) 的活性，但不抑制 JNK1 和 ERK2。”Biochem.Biophys.Res.Comm.. 266. 129-134

Liu,R.: "Antiapoptotic activity of the hGM-CSF receptor."J.Allergy Clin.Immunol.. 106. 10-18 (2000)

Liu,R.：“hGM-CSF 受体的抗凋亡活性。”J.Allergy Clin.Immunol.. 106. 10-18 (2000)