マウス左右軸形成及び嚢胚形成におけるlefty及びnodalの機能解析

左撇子和节点在小鼠左右轴形成和袋胚胎形成中的功能分析

• 批准号: 14034229
• 负责人: 目野 主税
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14034229/
• 关键词: 全胚培養; リポフェクション; 体軸形成; 左右軸; マウス; 胚発生

TGFβスーパーファミリーに属するNodalマウス発生初期において体軸形成に必須の役割を果たす分泌因子である。この体軸形成は、nodal発現からそのシグナル伝達に至るまでの厳密な制御によって成し遂げられている。軸形成におけるNodalシグナル制御の役割を明らかにするには、変異マウスやトランスジェニックマウスの作成のみならず、発生初期の胚に対する局所的遺伝子導入法を開発する事が不可欠である。これまでにエレクトロポレーションによるマウス胚への遺伝子導入が試みられ、嚢胚中期以降に対して適用できる事が報告されている。しかしながら、エレクトロポレーションは胚に対するダメージが大きく嚢胚初期以前での適用が難しいとされ、さらにダメージそのもので遺伝子発現が乱れる事が明らかになった。私たちは、細胞へのダメージが少ないリポフェクションによる遺伝子導入の確立を試みた。pEF-lacZの含むリポフェクション溶液を硝子キャピラリーによって、胚の標的部位に直接注入し全胚培養の後、x-gal染色によって遺伝子発現をモニターした。その結果、5.25dpcから8.5dpcの胚に対し局所的に遺伝子を導入できる事が明らかになった。しかしながら、注入によって胚の内腔に試薬が漏れた場合、標的部位以外にも遺伝子導入されることがあり、またエレクトロポレーションと比べて導入された細胞はモザイク状態になっていた。遺伝子導入の時期及びその目的によって、リポフェクションとエレクトロポレーションを使い分ける事で、遺伝子導入の適用範囲を拡げる事ができると考えられる。

TGF β-related factors are essential for the development of the somatic axis. The body axis formation, nodal occurrence, and formation of the body axis are described in detail below. In the process of shaft formation, Nodal control system is developed in the early stage of development. This is the first time that a virus has been introduced into a human body. In the early stages of the development process, it is difficult to apply the new technology to the development of the new technology. The first step is to establish a protocol for the introduction of a gene into a cell. pEF-lacZ-containing nitrate solution was injected directly into the target site of the embryo, and the x-gal staining solution was used to detect the development of the embryo. As a result, 5.25dpc is less than 8.5dpc, and the transmission of the corresponding information is less than 100 times. In case of leakage, the cells are injected into the lumen of the embryo, and the cells are introduced outside the target site. The time and purpose of gene introduction are discussed in detail.

项目成果

Yamamoto et al.: "Nodal antagonists regulate formation of the anteroposterioraxis of the mouse embryo"Nature. (in press).

Yamamoto 等人：“节点拮抗剂调节小鼠胚胎前后轴的形成”自然。

Perea-Gomez, A., et al.: "Nodal antagonists in the anterior visceral endoderm prevent the formation of Multiple primitive stread"Dev. Cell. 3. 745-756 (2002)

Perea-Gomez, A. 等人：“前内脏内胚层中的节点拮抗剂可防止多原条的形成”Dev。

Yamamoto et al.: "Nodal signaling induces the midline barrier by activating Nodal expression in the lateral plate."Development. 130・9. 1795-1804 (2003)

Yamamoto 等人：“Nodal 信号传导通过激活侧板中的 Nodal 表达来诱导中线屏障。”130・9 1795-1804 (2003)。

Sakuma, R., et al.: "Inhibition of Nodal signaling by Lefty mediated through interaction with common Receptors and efficient diffusion"Genes to Cells. 7. 401-412 (2002)

Sakuma, R., 等人：“Lefty 通过与常见受体相互作用和有效扩散来抑制 Node 信号转导”基因到细胞。