LINE逆転写酵素によるRNA3,末端配列の認識機構

LINE逆转录酶对RNA3末端序列的识别机制

• 批准号: 14035218
• 负责人: 岡田 典弘
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14035218/
• 关键词: LINE; ウナギ

H.Kazazianのグループは遺伝病の原因となったL1 LINEをヒトの培養細胞へ導入し、L1 LINEの高頻度転移の誘発に成功した。この系を用いて、L1 LINEの転移分子機構が明らかになりつつあるが、L1 LINEは、逆転写反応開始時の鋳型RNAの認識が緩やかである点が特殊である。このため、逆転写反応開始時の鋳型RNA認識が厳密で、ゲノムへの挿入配列特異性は無いような、より一般的なLINEの研究が待望される。本研究では、この実験系を用いて、ウナギLINEの逆転写酵素による鋳型RNA3'末端配列の認識機構を解析した。この系を用いた現在までの解析により、次の結果が得られた。3'相同配列全体を欠失すると、転移活性が失われ、予想されるステム-ループ構造の一部を崩す変異は、概ね転移活性を失い、このステム-ループ構造の塩基対を保つ変異も、転移活性を減少させる。このため、LINE RNA 3'配列の立体構造が、LINE逆転写酵素が逆転写反応を開始するのに必要であると思われるが、同時に特定の塩基配列も必要とされる可能性が高い。本研究では、LINE RNA 3'配列の変異体を体系的に作製し、LINE RNAとLINE逆転写酵素の相互作用の側面からLINEの転移機構を探った。我々は、培養細胞を用いてウナギLINEの転移を誘発・検出する系を確立し、この系を用いて、SINEとLINEの3'末端共通配列の機能を初めて実験的に示すことに成功した(Kajikawa ＆ Okada, Cell, 2002)。ウナギLINEは、ゲノムへの挿入配列特異性が無く、逆転写反応開始時の鋳型RNA認識は厳密なタイプであり、この研究の発展によりLINE転移機構のより一般的な理解が進展することが期待される。

H.Kazazian's high frequency induction of L1 LINE was successfully induced by the introduction of L1 LINE into cultured cells This is the first time that the L1 line has been used, and the molecular mechanism of the L1 line has been changed. The understanding of RNA at the beginning of reverse transcription is very close, and the study of RNA in reverse transcription is very important. In this study, we analyzed the mechanism of RNA3'terminal alignment by using reverse transcription enzymes This system is used to analyze the current situation, and the results are obtained. 3'The same alignment is lost, the shift activity is lost, the expectation is changed, part of the structure is changed, the shift activity is lost, the base of the structure is changed, the shift activity is reduced. There is a high possibility that the three-dimensional structure of the LINE RNA 3'alignment and the LINE reverse transcription enzyme are necessary for the initiation of reverse transcription and that specific nucleotide alignment is necessary at the same time. In this study, we explored the mechanism of the interaction between LINE RNA and LINE reverse transcription enzymes. We have successfully demonstrated the establishment of a system for the induction and detection of migration of SINE and LINE in cultured cells, and the initial implementation of the function of common alignment of SINE and LINE 3'ends (Kajikawa & Okada, Cell, 2002). We are looking forward to progress in general understanding of the mechanism of LINE migration.

项目成果

Kajikawa, Okada: "LINEs mobilize SINEs in the eel through a shared 3' sequence"Cell. 111. 433-444 (2002)

Kajikawa, Okada：“LINEs 通过共享的 3 序列动员鳗鱼中的 SINE”细胞。