生殖細胞分化過程におけるSINEの分子機構

SINEs在生殖细胞分化过程中的分子机制

• 批准号: 08275212
• 负责人: 岡田 典弘
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08275212/
• 关键词: RNA; SINE; ウナギ; 逆転写酵素; アミノ酸; 塩基配列; PCR法

生殖細胞中でRNAを介した転移因子が、実際に転移する現象は未だ報告されておらず、精巣分化過程を人為的に制御できるウナギの精巣を用いることで、SINEの転写及び、逆転写の機構が解明されれば、他に類のない画期的な報告ができるものと考え、次の通り実験を行った。ウナギのSINE配列を含んだDNA断片を単離して、塩基配列を決定、ウナギ精巣の各分化段階におけるSINEユニットの転写産物の存在を、ラジオアイソトープ存在下でのプライマー伸長反応を反応産物の電気泳動により検出した。また各分化段階のサンプルより粗タンパク質を抽出して、逆転写酵素活性測定を行い発現時期を特定、その活性を指標として逆転写酵素の精製を進め、アミノ酸の部分配列を決定、その配列より類推される塩基配列をプライマーとしてPCR法により逆転写酵素遺伝子の塩基配列を決定した。実験は現在も進行中であり、中にはサンプルを取り寄せている最中のものもあり、今後様々なデータも今後増えることが予想され、引き続き検討を加えていくことが必要である。

In germ cells, RNA expression and migration factors are not reported, sperm differentiation is artificially controlled, sperm expression and reverse transcription mechanisms are explained, and other types of gene expression are reported. SINE alignment includes DNA fragment isolation, base alignment determination, presence of SINE transcription products at various differentiation stages of the sperm, detection of electrokinetic reaction products of SINE transcription products in the presence of phase separation agents. To determine the nucleotide sequence of the reverse transcriptase by PCR, we need to determine the nucleotide sequence of the reverse transcriptase by the following methods: extraction of the crude protein, determination of the activity of the reverse transcriptase, purification of the reverse transcriptase, determination of the partial nucleotide sequence of the reverse transcriptase, etc. In the future, we will continue to discuss the issue of the future.

项目成果

Norihiro Okada,Mitsuhiro Hamada: "The 3′Ends of tRNA-Derived SINEs Originated from the 3′Ends of LINEs:A New Example from the Bovine Genome" J.Mol.Evol.43(in press). (1997)

Norihiro Okada、Mitsuhiro Hamada：“tRNA 衍生的 SINE 的 3 末端源自 LINE 的 3 末端：来自牛基因组的新例子”J.Mol.Evol.43（出版中）。