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Development of AAV (adeno-associated virus) vectors and their application to cancer therapy

AAV（腺相关病毒）载体的开发及其在癌症治疗中的应用

基本信息

批准号：
17016067
负责人：
OZAWA Keiya
金额：
$ 42.88万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016067/
关键词：
遺伝子ウイルス癌バイオテクノロジー遺伝子治療がん遺伝子治療 AAVベクターバキュロウイルス血管新生リンパ管新生 sFlt-1 sFlt-4 VEGF-C 抗腫瘍血管遺伝子療法リンパ行性転移抑制組織特異性ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤担癌ヌードマウス

项目摘要

A) Development of AAV (adeno-associated virus)-mediated cancer gene therapy :1) Establishment of AAV vector production system using baculovirus expression vectors : AAV vectors were efficiently produced in insect cells. We developed a column chromatographic method to isolate AAV vector particles from empty capsids, which can be adaptable to large-scale production of AAV vectors. Incorporation of the AAV p5 promoter into a transgene sequence increased the efficiency of AAV vector production.2) Basic studies of the modification of AAV vectors : Chimeric type 5 AAV vectors with type 2 VP1 had a larger amount of VP 1 in their capsids and transduced target cells in a similar manner with parent type 5 AAV vectors.3) Basic studies of AAV vector-mediated gene transfer and the regulation of transgene expression : We established standard methods of gene transfer into muscle, liver, adipose tissue and peritoneum. A histone deacetylase inhibitor enhanced AAV vector-mediated transgene expression in tumor cells.4) Examination of strategies for cancer gene therapy using AAV vectors : We conducted gene therapy experiments for refractory cancers (e.g. hematogenous and/or lymphogenous metastasis, and peritoneal dissemination) and showed therapeutic efficacy in tumor-bearing animals.B) Research on novel strategies for cancer gene therapy : For the treatment of refractory malignant lymphoma (B-cell non-Hodgkin lymphoma), we conducted experiments to develop a novel reinforced adoptive immuno-gene therapy using T-cells expressing a CAR (chimeric antigen receptor) targeting CD 19. We demonstrated that genetically engineered T-cells efficiently lyzed CD 19positive B-cell lymphoma cells in vitro.

1)利用杆状病毒表达载体建立AAV载体生产系统：在昆虫细胞中高效表达AAV载体。我们建立了一种从空衣壳中分离AAV载体颗粒的柱层析方法，该方法适用于AAV载体的大规模生产。将AAVP5启动子插入到转基因序列中，提高了AAV载体的生产效率。2)AAV载体修饰的基础研究：带有2型VP1的嵌合型5型AAV载体的衣壳中有更多的VP1，并以与亲本5型AAV载体相似的方式转导靶细胞。3)AAV载体介导的基因转移和转基因表达调控的基础研究：我们建立了向肌肉、肝脏、脂肪组织和腹膜的基因转移的标准方法。组蛋白去乙酰酶抑制剂增强AAV载体介导的转基因在肿瘤细胞中的表达。4)使用AAV载体的癌症基因治疗策略的检查：我们对难治性癌症(如血液和/或淋巴转移和腹膜转移)进行了基因治疗实验，并在荷瘤动物中显示了治疗效果。B)癌症基因治疗的新策略的研究：用于治疗难治性恶性淋巴瘤(B细胞性非霍奇金淋巴瘤)，我们利用表达针对CD19的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞进行实验，以开发一种新型的强化过继免疫基因疗法。我们证明了基因工程T细胞在体外有效地裂解了CD19阳性的B细胞淋巴瘤细胞。