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転写関連因子のアセチル化を可視化するシステムの開発

开发转录相关因子乙酰化可视化系统

基本信息

批准号：
17054046
负责人：
伊藤昭博
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17054046/
关键词：
FRET アセチル化ヒストン p53 蛍光プローブ

项目摘要

翻訳後修飾としてのアセチル化はヒストンの構造機能を制御することにより遺伝子の発現を制御するだけでなく、がん抑制遺伝子産物であるp53を初めとした様々な転写因子の活性化を制御することによっても転写を制御していることが明らかになってきた。そこで、ヒストンとp53のアセチル化を生細胞内で可視化する蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を原理とした蛍光プローブの開発を行った。上記蛍光プローブはDECODE回路を追究するための強力な手段になりうると考えられる。アセチル化ヒストンを検出する蛍光プローブを作製するために、FRETを起こす蛍光ドナー蛋白質であるCFPにヒストンH4を連結した蛋白質と蛍光アクセプター蛋白質であるYFPにアセチル化ヒストンH4結合蛋白質を連結した蛋白質をリンカーで結ぶことによって、アセチル化依存的に分子内でFRET変化を起こすヒストンH4アセチル化の蛍光プローブを作製し、内在性のヒストンH4と同様にクロマチン内に取り込まれていることを確認した。さらに、ヒストン脱アセチル化阻害剤であるトリコスタチンA(TSA)によって蛍光プローブのアセチル化が誘導され、FRET変化が起きることを確認した。以上の結果から、作製した蛍光プローブは生細胞内で内在性のヒストンH4と同様の挙動を示し、蛍光プローブのアセチル化はFRET変化に伴う蛍光強度比変化として検出可能であることが分かった。アセチル化p53を検出する蛍光プローブを作製するために、同様にCFPにp53を連結した蛋白質とYFPにアセチル化p53結合蛋白質を連結した蛋白質をリンカーで結ぶことによって、アセチル化依存的に分子内でFRET変化を起こすp53アセチル化の蛍光プローブを作製した。作製した蛍光プローブが核に取り込まれていることを確認した。

After the modification, the system can be used to control the system of the system. The system can be used to control the system of the system, and to suppress the information of the system. The system is sensitive to the information of the system, the computer, the computer. The principle of photoluminescence (FRET) is based on the principle that the operation of the system can be performed in the presence of light. In the light circuit, the DECODE circuit is used to investigate the strength of the device. In the first place, the FRET was used to determine whether the protein was linked to H4. The protein was linked to H4. The intra-molecular FRET that is dependent on the structure of the molecule is sensitive to H4 and H4, while the internal structure of the H4 is the same as the internal one. In this case, you will need to know that you will not be able to prevent the damage. (TSA) you will need to know if you want to make sure that you are aware of the situation. The FRET will enable you to make sure that you do not want to receive any information. The results of the above results show that it is possible to measure the intensity of FRET in the presence of photosensitizer H4. The expression of p53 was induced by CFP. The protein was linked to p53. The results showed that p53 was induced by intramolecular FRET, which is dependent on p53. Please check and confirm that you are not allowed to do so.