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テロメアDNAを利用したカリウムイオンの蛍光イメージング試薬の開発

利用端粒DNA开发钾离子荧光成像试剂

基本信息

批准号：
19021037
负责人：
竹中繁織
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Kyushu Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトテロメアDNA配列を有するオリゴヌクレオチドの両置換基末端にピレンを導入したPSO4を用いて、K^+添加に伴うゲル電気泳動、吸収、円二色性、蛍光、蛍光偏光スペクトル変化等の解析によってヒトテロメアDNAの4本鎖構造(最近になってbasket、chahr、propeller、hybrid I、hybrid II型の五つ)のうちchair型の時だけ効果的なFRETが見られると予測された。そこで前年度はG-リッチオリゴヌクレオチドにトロンビン結合アプタマー(TBA)配列を導入することによってより高いFRET効率を示すPSO2の合成に成功した。しかし、細胞内へ導入すると導入された細胞の73%が細胞死を起こすことが明らかとなった。これは、TBA配列が核内に存在するヌクレオリンタンパクが結合したためと考えられた。そこで当該年度では二つのFRET色素に加えビオチンを導入したPSO5を合成した。これをストレプトアビジンと結合させ同様に細胞へ導入することによって細胞毒性を軽減することに成功した。PSO5をアビジンに結合させることによってヌクレオリンの相互作用が阻害されたものと考えられたが、このような条件によってもPSO5の核への移行が観察されたが、一部は細胞質に留まっていることがわかった。そこで細胞内のK^+濃度を減少させることが知られているAmphotericin Bの添加に伴う蛍光変化を調べた。その結果核内のK^+濃度の上昇がみちれた。これは、核内のK^+をモニターできた最初の例と見られる。しかしながら、PSO5の合成収率は低く、また、精製も困難であった。そこで、ペプチド-オリゴヌクレオチドコンジュゲートを利用してPSO6の設計を行い、その合成に成功した。予備的検討では、PSO5よりも感度良くK^+濃度の蛍光イメージングが可能なことが明らかとなった。

There are many devices in DNA, such as electrophoretic swimming, absorption, dichroism, luminescence, polarizing light, etc. (recently built by basket, chahr, propeller, hybrid I, etc.). Hybrid II (five days) the FRET of the temporary fruit of the Char type will be affected by the weather. In the previous year, the PSO2 synthesis was successful in combination with TBA in the previous year. The high FRET rate indicates that the PSO2 synthesis was successful. In the cell, the cell is 73% dead, and the cell is dead. There are some problems in the core of the system, such as the combination of the two cores, the TBA configuration and the combination of the two cores. In the current year, the FRET pigment is added to the PSO5 synthesis. In the same way, the cells of the same family were transferred into the cell. The cytotoxicity was significantly higher than that of the control. In combination with the PSO5 system, there was a significant increase in the number of interactions. there was an increase in the number of interactions. the conditions caused by the interaction.Then, the conditions, the conditions, the PSO5, the migration, the observation, the computer, the cell, the computer, the computer. To add a companion light to the Amphotericin B, add a companion to the cell. The results show that there are some errors on the K ^ + temperature in the core. In the core, the initial example is K^ + in the core. The synthesis rate of PSO5 is low, poor and poor. You can use the PSO6 to design a design line and synthesize a successful one. You may be aware of the sensitivity of the equipment, the PSO5, the sensitivity, the sensitivity.