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インシュリン情報伝達系に基づく生理活性物質の化学選択性評価法の創製

创建基于胰岛素信号系统评估生理活性物质化学选择性的方法

基本信息

批准号：
11740408
负责人：
小澤岳昌
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11740408/
关键词：
インシュリン情報伝達プロテインスプライシング緑色蛍光蛋白質(GFP)VDE dnaE リン酸化ルシフェラーゼ蛋白質間相互作用インシュリン生理活性物質選択性蛍光プローブ蛍光共鳴エネルギー移動表面プラズモン共鳴

项目摘要

インシュリン情報伝達系に基づく生理活性物質の化学選択性を評価するための分析法の開発を行った.1.蛋白質のスプライシング反応を用いた蛋白質-蛋白質間相互作用を検出するための新規方法を開発した.相互作用検出用プローブは,2つの蛋白質に各々連結される2つのプローブ分子a,bからなる.プローブaは,スプライシングを起こす蛋白質VDEのN末側に緑色蛍光蛋白質(GFP)のN末側を,プローブbは,VDEのC末側にGFPのC末を結合した.これらプローブを相互作用する蛋白質カルモジュリンとM13ペプチドに連結し,大腸菌内で発現させた.カルモジュリンとM13存在下では510nmの蛍光極大が観測された.カルモジュリンとM13との相互作用により,VDEのN末とC末が近接しスプライシング反応が起こり,GFPが形成されたことを確認した.本法は細胞種を問わず原理的にいかなる蛋白質-蛋白質間相互作用を解析できる一般性のある方法であることを示した.(Anal.Chem.72,5151-5157(2000))1.インシュリン情報伝達過程のチロシンのリン酸化とSH2ドメインとの相互作用を指標とした生理活性物質の化学選択性を評価する新規方法を開発した.蛋白質間相互作用を検出する基本原理は(1)に従った.スプライシングを起こす蛋白質としてdnaE蛋白質を用い,スプリットしたルシフェラーゼにdnaEをつなげたペプチドをプローブ分子とした.リン酸化蛋白質IRS-1及びその標的蛋白質SH2ドメインをプローブに接続し,インシュリンリセプターを過剰発現させた細胞内に発現させた.インシュリンを添加すると,濃度依存的にスプライシング反応が起こりルシフェラーゼ活性が上昇することが分かった.(投稿中)

Development of analytical methods for the evaluation of the chemical selectivity of physiologically active substances in protein systems. Interactions between molecules a, b, c, d, e, e, The protein VDE at the N terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the N terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of VDE at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the N terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of VDE at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of VDE at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of VDE at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of VDE at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the C terminal side of green fluorescent protein (GFP) at the The protein chain of M13 is linked to the protein chain of M13, which is produced in Escherichia coli. In the presence of M13, the luminescence maximum at 510 nm was measured. The interaction between VDE and M13 was confirmed by the formation of GFP. This method is based on the principle of protein-protein interaction. (Anal. Chem. 72, 5151 - 5157 (2000)) 1. Development of a new method for evaluating the chemical selectivity of physiologically active substances as an indicator of the interaction between the two substances. The basic principle of protein-protein interaction is (1). The protein content of the protein is used in the protein content of the protein. The protein content of the protein is used in the protein content of the protein. IRS-1 and other target proteins SH-2 are found in cells. In addition, the concentration dependent activity increases. (in submission)