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インシュリン情報伝達系に基づく生理活性物質の化学選択性評価法の創製

インシュリン情報伝達系に基づく生理活性物質の化学選択性評価法の創製
创建基于胰岛素信号系统评估生理活性物质化学选择性的方法
批准号：
11740408
负责人：
小澤 岳昌
金额：
$1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 2000
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11740408/
关键词：
インシュリン情報伝達プロテインスプライシング緑色蛍光蛋白質(GFP)VDEdnaEリン酸化ルシフェラーゼ蛋白質間相互作用インシュリン生理活性物質選択性蛍光プローブ蛍光共鳴エネルギー移動表面プラズモン共鳴

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项目成果

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インシュリン情報伝達系に基づく生理活性物質の化学選択性を評価するための分析法の開発を行った.1.蛋白質のスプライシング反応を用いた蛋白質-蛋白質間相互作用を検出するための新規方法を開発した.相互作用検出用プローブは,2つの蛋白質に各々連結される2つのプローブ分子a,bからなる.プローブaは,スプライシングを起こす蛋白質VDEのN末側に緑色蛍光蛋白質(GFP)のN末側を,プローブbは,VDEのC末側にGFPのC末を結合した.これらプローブを相互作用する蛋白質カルモジュリンとM13ペプチドに連結し,大腸菌内で発現させた.カルモジュリンとM13存在下では510nmの蛍光極大が観測された.カルモジュリンとM13との相互作用により,VDEのN末とC末が近接しスプライシング反応が起こり,GFPが形成されたことを確認した.本法は細胞種を問わず原理的にいかなる蛋白質-蛋白質間相互作用を解析できる一般性のある方法であることを示した.(Anal.Chem.72,5151-5157(2000))1.インシュリン情報伝達過程のチロシンのリン酸化とSH2ドメインとの相互作用を指標とした生理活性物質の化学選択性を評価する新規方法を開発した.蛋白質間相互作用を検出する基本原理は(1)に従った.スプライシングを起こす蛋白質としてdnaE蛋白質を用い,スプリットしたルシフェラーゼにdnaEをつなげたペプチドをプローブ分子とした.リン酸化蛋白質IRS-1及びその標的蛋白質SH2ドメインをプローブに接続し,インシュリンリセプターを過剰発現させた細胞内に発現させた.インシュリンを添加すると,濃度依存的にスプライシング反応が起こりルシフェラーゼ活性が上昇することが分かった.(投稿中)
期刊论文(12)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
M.Sato, et al.: "Fluorescent Indicator for Cyclic GMP Based on Cyclic GMP-Dependent Protein Kinase Iα and Green Fluorescent Proteins"Anal.Chem.. 72. 5918-5924 (2000)
M.Sato 等人：“基于环 GMP 依赖性蛋白激酶 Iα 和绿色荧光蛋白的环 GMP 荧光指示剂” Anal.Chem.. 72. 5918-5924 (2000)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
T.ozawa, et al.: "How Can Ca^<2+> Selectively Activate Recoverin in the Presence of Mg^<2+>? Surface Plasmon Resonance and FT-IR Spectroscopic Studies"Biochemistry. 39. 14495-14503 (2000)
T.ozawa 等人：“How Can Ca^<2> Selectively Activate Recoverin in the Presence of Mg^<2>？表面等离子共振和 FT-IR 光谱研究”生物化学。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
M.Sato.et al.: "A Fluorescent Indicator for Tyrosine Phosphorylation-Based Insulin Signaling Pathways"Anal.Chem. 71. 3948-3954 (1999)
M.Sato.等人：“基于酪氨酸磷酸化的胰岛素信号通路的荧光指示剂”Anal.Chem。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
T.Yoshida,et al.: "An SPR-based Screening Method for Agonist Selectivity for Insulin Singnaling Pathways Based on the Binding of Phosphotyrosine of its Specific Binding Protein"Anal.Chem. 72. 6-11 (2000)
T.Yoshida 等人：“一种基于 SPR 的胰岛素信号传导途径激动剂选择性筛选方法，该方法基于其特定结合蛋白的磷酸酪氨酸的结合”Anal.Chem。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    低分子量生体分子を高選択的認識する革新的膜タンパク質センサーの開発
    • 批准号：
      23K17927
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
    • 资助金额：
      $4.16万
    • 财政年份：
      2023
    • 负责人：
      小澤 岳昌
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    Innovations in fundamental technologies for thermal manipulation of biomolecules and multidimensional cellular analysis
    • 批准号：
      22H00322
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
    • 资助金额：
      $27.54万
    • 财政年份：
      2022
    • 负责人：
      小澤 岳昌
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    定量的生体分子イメージング・操作法の開発
    • 批准号：
      26248036
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
    • 资助金额：
      $9.82万
    • 财政年份：
      2014
    • 负责人：
      小澤 岳昌
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    Gタンパク質シグナル伝達を可視化する発光プローブの開発
    • 批准号：
      09F09051
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $0.96万
    • 财政年份：
      2009
    • 负责人：
      小澤 岳昌
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    海外基金