二重鎖切断修復に働く新規発がん防御因子の探索とその機能・構造解析

寻找作用于双链断裂修复的新型癌症保护因子及其功能和结构分析

• 批准号: 20012049
• 负责人: 胡桃坂 仁志
• 金额: $ 3.46万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20012049/
• 关键词: DNA修復; 相同組換え; RAD51; 二重鎖切断修復; 抗がん剤; GEMIN2; EVL; PSF

二重鎖DNA切断は、環境中および生体内の要因によって日常的に引き起こされるが、相同組換え経路によって正確に修復される。このDNA修復経路の破綻は、高頻度の染色体異常を引き起こすことが知られており、その結果、発がん原因となることが知られている。ヒトにおける相同組換え修復の中心酵素はRAD51であり、RAD51と機能的および物理的に相互作用する因子群が、これまでに10種類以上解析されているが、正確かつ迅速に二重鎖切断を修復するためには、これらのRAD51相互作用因子群のみでは十分ではない。そこで本研究では、相同組換え修復に関わる新規タンパク質因子を同定し、その機能・構造解析を通して、発がん防御に重要な相同組換えによる二重鎖切断修復の分子機構を明らかにすることを目的とする。まず、ヒトRAD51の機能解析を生化学的におこない、その反応機構の理解を深めた。そして当研究室においてすでに同定されている、新規RAD51結合タンパク質であるGEMIN2、PSFおよびEVLの機能解析を、生化学的手法を用いて行った。その結果、これらの因子はいずれもRAD51の試験管内でのDNA組換え活性を上昇させる新規の因子であることが明らかになった。また、さらなるRAD51結合因子を同定するために、two-hybrid法およびプロテオミクス法によるスクリーニングを行った。これらの解析を通して、相同組換え修復経路における、いまだ未同定の反応素過程の一旦を明らかにすることができた。さらに、RAD51のDNA組換え反応に影響を与える低分子化合物を、化学療法基盤情報支援班より供給された「標準阻害剤キット」により行い、DIDSがRAD51の相同組換え活性を阻害することを見いだした。このことは、RAD51の活性亢進によるがん細胞での染色体異常をコントロールする薬剤の開発に重要な知見を与える。

Double lock DNA cut は, environment お よ び の gave birth to the body by に よ っ て daily に lead き up こ さ れ る が, the same group in え 経 road に よ っ て に correct repair さ れ る. こ の DNA repair flaw の は 経 road, high frequency を lead き の chromosome abnormality こ す こ と が know ら れ て お り, そ の results, 発 が ん reason と な る こ と が know ら れ て い る. ヒ ト に お け る in same group え repair enzyme は の center RAD51 で あ り, RAD51 と functionary お よ び physical に interaction す る factor group が, こ れ ま で に above 10 kinds analytic さ れ て い る が, correct か つ に double lock quickly cut を repair す る た め に は, こ れ ら の RAD51 interaction factor group の み で は で very much Youdaoplaceholder0 な な. そ こ で this study で は, the same group in え repair に masato わ る new rules タ ン パ を ク qualitative factors with し, そ の function, structural analysis を tong し て, 発 が ん defense に important な in same group え に よ る double lock to cut off the repair の molecular mechanism を Ming ら か に す る こ と を purpose と す る. Analytical を ま ず, ヒ ト RAD51 の function of biochemistry に お こ な い, そ の の 応 authorities understand を deep め た. そ し て when laboratory に お い て す で に with fixed さ れ て い る, new rules RAD51 combining タ ン パ ク qualitative で あ る GEMIN2, PSF お よ び EVL [1] の function analytical を, biochemical technique を い て line っ た. そ の results, こ れ ら の factor は い ず れ も RAD51 の test tube で の DNA group activity in え を rise さ せ る new rules の factor で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, さ ら な る RAD51 combined with fixed factor を す る た め に, two - hybrid お よ び プ ロ テ オ ミ ク ス method に よ る ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. こ れ ら の parsing を tong し て road, the same group in え repair 経 に お け る, い ま だ failed with の anti 応 element process once の を Ming ら か に す る こ と が で き た. Group in え さ ら に, RAD51 の DNA against 応 に influence を and え る を low molecular compounds, chemical treatment/plate of intelligence support class よ り supply さ れ た "standard resistance against tonic キ ッ ト" に よ り い, DIDS が RAD51 の in same group え active を resistance against す る こ と を see い だ し た. こ の こ と は, RAD51 の active hyperthyroidism に よ る が ん cells で の chromosome abnormality を コ ン ト ロ ー ル す る 薬 tonic の open 発 に important な knowledge を and え る.

项目成果

新規ヒトRAD51相互作用タンパク質PSFの生化学的解析

新型人类 RAD51 相互作用蛋白 PSF 的生化分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 両角佑一;滝沢由政;胡桃坂仁志
• 通讯作者: 胡桃坂仁志

Biochemical study of a novel RAD51B-interacting protein, EVL (Ena/Vasp-like)

新型 RAD51B 相互作用蛋白 EVL（Ena/Vasp 样）的生化研究

• 发表时间: 2008
• 作者: Takaku;M.;Hosoya;N.;Takizawa;Y.;Nakayama;S.;Machida;S.;Ikawa;S.;Shibata;T.;Mivagawa;K.;Kurumizaka;H.
• 通讯作者: H.

Biochemical analysis of the N-terminal domain of human RAD54B.

• DOI: 10.1093/nar/gkn516
• 发表时间: 2008-10
• 期刊: Nucleic acids research
• 影响因子: 14.9
• 作者: Sarai N;Kagawa W;Fujikawa N;Saito K;Hikiba J;Tanaka K;Miyagawa K;Kurumizaka H;Yokoyama S
• 通讯作者: Yokoyama S

Identification of a second DNA binding site in the human Rad52 protein

• DOI: 10.1074/jbc.m802204200
• 发表时间: 2008-08-29
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Kagawa, Wataru;Kagawa, Ako;Yokoyama, Shigeyuki
• 通讯作者: Yokoyama, Shigeyuki

Structural analysis of the human Rad51 protein-DNA complex filament by tryptophan fluorescence scaning anaysis : transmission of allosteric effects between ATP binding and DNA binding

通过色氨酸荧光扫描分析对人类 Rad51 蛋白-DNA 复合丝进行结构分析：ATP 结合和 DNA 结合之间变构效应的传递

• 发表时间: 2008
• 期刊: Jounal of Molecular Biology 383
• 作者: Renodon-Corniere;A.;Takizawa;Y.;Conilleau;S.;Tran;V Iwai;S.;Kurumizaka;H.;Takahashi;M.
• 通讯作者: M.