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染色体ダイナミクスの生化学・構造生物学的解析

染色体动力学的生化和结构生物学分析

基本信息

批准号：
19038022
负责人：
胡桃坂仁志
金额：
$ 5.7万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19038022/
关键词：
ヒストンバリアント染色体クロマチンヌクレオソーム結晶構造解析ヒストンシャペロンピストン結合ヒストン遺伝子及び染色体タンパク質と酵素生体高分子構造活性相関生体機能関連物質構造生物学生体分子立体構造解析及び予測 X線結晶解析

项目摘要

染色体の構造は細胞周期を通してダイナミックに変動している。近年、この染色体構造のダイナミクスが、遺伝子の発現制御、DNA複製、DNA組換えなどを調節するために重要な役割を果たしていることが示されてきた。本研究では、染色体ダイナミクスとDNAの機能発現との相関を、精製タンパク質群による試験管内再構成系を用いた生化学的および構造生物学的解析によって明らかにすることを目的とする。染色体高次構造の変動は、染色体の主要な構成因子である、ヒストンタンパク質群と、ヒストンに直接結合するストンシャペロンが中心的な役割を果たす。そこで、本研究では、ヒストンシャペロンとして、ヒトNAP1、NAP2、PP2Cγを選定し、これらをリコンビナントタンパク質として精製した。そして、すでに確立した精製ヒストンを用いた試験管内再構成系によって、ヒストンシャペロンのクロマチン構造形成機構を、ヌクレオソームレベルで解析した。その際、ピストンH3として、ヒトで見いだされている5種類のヒストンH3バリアント、H3.1、H3.2、H3.3、H3t、CENP-Aのすべてを精製して用いた。その結果、NAP2およびPP2Cγにはヒストンバリアント特異性が認められなかったが、NAP1はH3tによるヌクレオソーム形成に欠損を持つことが明らかになった。並行して、ピストンH3バリアントを含むヌクレオソームの結晶化を行い、精巣特異的に発現が認められるH3tを含むヌクレオソームの立体構造を決定することに成功した。また、新規ヒストン結合タンパク質を、HeLa細胞抽出液と精製ヒストンを結合したビーズを用いたプロテオミクス解析によって検索し、ヒストン結合タンパク質群のカタログを作成した。

Chromosomal DNA is responsible for cell cycle regulation, cell cycle, cell cycle, cell cycle and cell cycle. In recent years, human chromosomes have been used to make information about how to control the system, DNA replication, and DNA. In recent years, it is very important to cut the fruit in the system. In this study, chromosomal DNA analysis and DNA analysis showed that there were significant differences between the two groups in order to form a system of biochemistry and biological analysis. The movement of high-order chromosomes, the main factors of chromosome formation, the population of chromosomes, and the frequency of chromosomes are directly combined with the service cutting fruit of the center of operation. In this study, we need to know that NAP1, NAP2, PP2C γ have been selected, and that they have been selected for this study. Make sure that the system is formed in the system, the system is formed in the system, the system is built, and the system is analyzed. International, H3, CENP-A, H3, H3t, H3t, H3t, The results showed that NAP2