細胞膜足場形成の多次元複合体の構造生物学

形成细胞膜支架的多维复合物的结构生物学

• 批准号: 20051017
• 负责人: 箱嶋 敏雄
• 金额: $ 3.97万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20051017/
• 关键词: タンパク質; 複合体; 足場形成; 細胞骨格; 接着分子

本年度は,Tiam1/STEFとCD44, PAR3, JIP2との複合体の調製と基礎実験わ重点的に推進した.CD44の細胞質ドメインとPAR3の結合領域は、大腸菌でGST-融合タンパク質として調製して,プルダウンアッセイやBIAcoreを用いた結合実験により結合に必要な最小領域を決定した.その結果,酸性残基に富む領域が結合部位と判明した.アミノ酸配列の特徴から,CD44やephrin B1,1,3あるいはNMDA受容体等のmotif-I, PAR3やJIP2等のmotif-IIとの分類した.前年度に構造決定したTiam1/STEFのPHCCExドメインには塩基性残基が密集した溝がある.これらを含んだ保存された塩基性残基(ArgとLys)にAla変異を導入して,CD44, PAR3, JIP2との結合への影響を調べた.その結果,結合部位をCCサブドメインとExサブドメインからなる塩基性の溝と同定した.motif-Iとmotif-IIの両者ともこの溝に結合することもわかった.更に,上記の相互作用が細胞レベルでも重要であるかどうかを,変異Tiam1を用いて解析した.その結果,結合部位での変異が細胞膜の葉状仮足の誘導へ大きく影響することがわかり,細胞レベルでも上記の相互作用が重要であることが証明できた.以上のデータをまとめて,EMBO Journalに論文発表した.また,これと平行して,植物ホルモン受容体の構造研究を推進して,ジベレリン受容体によるジベレリン認識と標的タンパク質認識に関しての構造的知見を更に深めるために,合成アゴニストとの相互作用の解析を行った.

This year と,Tiam1/STEFとCD44, PAR3 JIP2 と の complex の modulation based be と 験 わ key に propulsion し た. CD44 の cytoplasm ド メ イ ン と PAR3 は の combining field, coliform で GST - fusion タ ン パ ク qualitative と し て modulation し て, プ ル ダ ウ ン ア ッ セ イ や BIAcore を with い た combination be 験 に よ り combining に な minimum necessary field を decided し た. そ の As a result, the acid residues に rich が む field combining site と.at し た. ア ミ ノ acid with column の, 徴 か ら, CD44 や ephrin B1, 1, 3 あ る い は NMDA by let body such as の motif - I, PAR3 や JIP2 etc. の motif - II と の classification し た. Before the annual に structure decision し た Tiam1 / STEF の PHCCEx ド メ イ ン に は salt basic residues が intensive し た ditch が あ る. こ れ ら を containing ん だ save さ れ た salt basic residues (Arg と Lys) に Ala - different を import し て, CD44, PAR3, JIP2 と の combining へ の influence を adjustable べ た. そ の results, combining site を CC サ ブ ド メ イ ン と Ex サ ブ ド メ イ ン か ら な る salt basic の ditch と with fixed し た. Motif -i と motif - II の struck the と も こ の ditch に combining す る こ と も わ か っ た. More に, written の が cell interaction レ ベ ル で も important で あ る か ど う か を, - different Tiam1 を with い て parsing し た. そ の results, combining site で の - different が membrane の leaf 仮 induced へ big foot の き く influence す る こ と が わ か り, cell レ ベ ル で も written の interaction が important で あ る こ と が prove で き た. Above: デ デ タをまとめて,EMBO Journal に paper 発 table し た. ま た, こ れ と parallel し て, plant ホ ル モ ン is の let body structure research を propulsion し て, ジ ベ レ リ ン by let body に よ る ジ ベ レ リ ン know と mark タ ン パ ク qualitative understanding に masato し て の structure of knowledge more に を deep め る た め に, synthetic ア ゴ ニ ス ト と の interaction の parsing line を っ た.

项目成果

Crystallographic characterization of the membrane-targeting domain of Rac-specific guanine nucleotide exchange factors Tiam1 and 2.

Rac 特异性鸟嘌呤核苷酸交换因子 Tiam1 和 2 膜靶向结构域的晶体学表征。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Acta Crystallogr. F 64
• 作者: Terawaki;S.
• 通讯作者: S.

NMRを用いた小胞体ストレスセンサータンパク質Irelpの基質認識機構の解析

核磁共振分析内质网应激传感器蛋白Irelp的底物识别机制

• 发表时间: 2009
• 作者: 冨田聡;加藤勝;真木和美;鈴木団;河原郁美
• 通讯作者: 河原郁美

ジベレリン受容体のジベレリン識別とエフェクター認識の構造的基礎

赤霉素受体识别赤霉素和效应子识别的结构基础

• 发表时间: 2009
• 作者: 箱嶋敏雄;村瀬浩司;平野良憲;Tai-ping Sun
• 通讯作者: Tai-ping Sun

A molecular mechanism of P-loop pliability of Rho-kinase investigated by molecular dynamic simulation

• DOI: 10.1007/s10822-008-9214-7
• 发表时间: 2008-04
• 期刊: Journal of Computer-Aided Molecular Design
• 影响因子: 3.5
• 作者: K. Gohda;T. Hakoshima

構造生物学の現代細胞生物学への展開

结构生物学发展为现代细胞生物学

• 发表时间: 2009
• 作者: Terawaki;S.;森智行;右田裕二;河原郁美;佐藤明子;箱嶋敏雄;西村明幸;箱嶋敏雄
• 通讯作者: 箱嶋敏雄